Cálculos De Mediciones De Proteínas De A205 - Thermo Scientific NanoDrop One Guia Del Usuario

Medición de Proteínas de A205
Cálculos de mediciones de proteínas de A205
Como en las aplicaciones de otras proteínas, Proteínas
de A205 utiliza la ecuación Beer-Lambert
correlacionar absorbancia y concentración a partir del
coeficiente de extinción y el camino óptico de la
muestra.
Esta aplicación ofrece tres opciones (mostradas a la
derecha) para seleccionar un coeficiente de extinción
adecuado para cada muestra medida y utilizarlo junto
con la ley de Beer en el cálculo de concentración de la
muestra.
Si se conoce el coeficiente de extinción de la muestra,
ε
elija la opción 1 % (masa) e introduzca el valor. De lo
contrario, calcula el coeficiente de extinción y elija la
opción más idónea para la solución de la muestra.
Sugerencia: Lo ideal sería determinar empíricamente el
coeficiente de extinción utilizando una solución de la
proteína de interés con una concentración conocida que
utilice el mismo tampón.
Las concentraciones proteínicas calculadas se basan en
el valor de absorbancia a 205 nm, el coeficiente de
extinción seleccionado (o introducido) y el camino óptico
de la muestra. También se puede aplicar una corrección
de línea base de punto único.
La concentración se proporciona en unidades de masa.
En Internet se pueden encontrar calculadoras que
convierten las unidades de concentración másica a molar
a partir de la secuencia de la muestra.
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Opciones disponibles para el coeficiente de extinción
para
• 31, se presupone que
• Ámbitos, se presupone que
(A280/A205).
• Otras proteínas, introduzca el coeficiente de extinción másica en
l/gm-cm para 1 mg/ml (
Nota: Consultar detalles en
Valores medidos
Absorbancia de A205
Nota: Para las mediciones de absorbancia en microvolúmenes y las
mediciones tomadas en cubetas no estándar (las que no son de 10 mm), los
espectros se normalizan en un equivalente de camino óptico de 10 mm.
• Los valores de absorbancia de las proteínas se miden a 205 nm con el
espectro normalizado. Cuando Corrección de línea base no está
seleccionado, este es el valor de A205 proporcionado y el valor
utilizado para calcular la concentración proteínica.
• Cuando
valor de absorbancia normalizada y corregida en línea base a 205 nm,
que se utiliza para calcular la concentración proteínica.
Absorbancia de A280
• También se proporciona el valor de absorbancia normalizada y
corregida en línea base (si la corrección está seleccionada) a 280 nm.
ε
0,1 % (1 mg/ml) a 205 nm = 31.
ε
0,1 % (1 mg/ml) a 205 nm = 27 + 120 *
ε
0,1 %) de solución de proteína.
Tipo de muestra.
Corrección de línea base está seleccionado, se proporciona el
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