Thermo Scientific NanoDrop One Guia Del Usuario página 268

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Inteligencia de muestras Acclaro
Teoría detrás del análisis de contaminantes
Las mediciones de absorbancia UV y UV-visible se utilizan para cuantificar muestras de ácidos
nucleicos y proteínas a 260 nm y 280 nm, respectivamente. El análisis está basado en el hecho
de que la absorbancia total de una solución mezclada en una longitud de onda dada es la suma
de los valores de absorbancia de cada componente de la mezcla.
Un reto difícil de este método es que el número de materiales utilizados en el proceso de
extracción puede absorber luz en distintas zonas a lo largo del espectro. Cuando estos
contaminantes están presentes en una muestra, puede interferir en el análisis e inflar la
absorbancia en la longitud de onda de interés, lo que origina una sobrestimación de la
concentración de analitos.
Los índices de pureza se utilizan tradicionalmente para detectar la presencia de contaminantes
que podrían afectar a aplicaciones de recuperación y purificación. Sin embargo, los índices de
pureza no siempre ofrecen una imagen completa de la posible contaminación. Cuando un
índice de pureza cae fuera del intervalo esperado, se suele examinar la calidad del perfil
espectral.
Nuestra tecnología Acclaro aplica un enfoque cuantitativo al análisis de contaminantes.
Mediante complejos algoritmos matemáticos, Acclaro analiza los datos espectrales para
identificar probables contaminantes en una muestra y elimina la contribución debida al
contaminante de los resultados de la muestra. Como resultado, se consigue un valor de
concentración más exacto del analito de interés y un análisis de mayor calidad del nivel de
contaminación.
Dado que el espectro de un compuesto puro es exclusivo de ese compuesto, un espectro
combinado de materiales mayormente conocidos que tienen algunas interacciones se puede
descomponer matemáticamente en espectros de sus componentes y por ende permitir
identificar sus componentes. El algoritmo del análisis de contaminantes utiliza una zona
espectral estrecha (220–285 nm) alrededor de la longitud de onda del análisis (260 nm para
ácidos nucleicos y 280 nm para proteínas) para determinar la contribución a la absorbancia de
posibles contaminantes conocidos (proteína o ácido nucleico y fenol) que absorben en esa
zona. Se analiza todo el espectro para determinar la presencia de otros posibles contaminantes,
como la guadinina HCL y el tiocianato de guanidinio, que son reactivos comúnmente
utilizados en la purificación de ácidos nucleicos.
262 Guía del usuario de NanoDrop One
• % del coeficiente de variación del resultado de medición (incertidumbre x 100/resultado
de medición = 5,3 %; un %CV alto indica que el resultado de medición está próximo al
límite de detección del instrumento o que algún componente está interfiriendo).
• Concentración de ácidos nucleicos original (451,2 ng/μl), basada en la absorbancia total
corregida en línea base (muestra más contaminante) en la longitud de onda del análisis
• Concentración de ácidos nucleicos corregida (311,9 ng/μl), en base a la absorbancia
corregida (muestra menos contaminante) en la longitud de onda del análisis
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