Kits Y Protocolos Del Ensayo De Proteínas; Trabajo Con Curvas Estándar - Thermo Scientific NanoDrop One Guia Del Usuario

Medición de Proteínas de BCA
Kits y protocolos del ensayo de proteínas
Visite la información del sitio web de NanoDrop sobre los kits y protocolos actualizados de los
instrumentos NanoDrop One. Siga las recomendaciones del fabricante del kit del ensayo para
todos los patrones y muestras (desconocidas). Asegúrese de utilizar en todo el ensayo los
mismos tiempos y temperatura.
El fabricante del kit también puede suministrar patrones de proteínas para generar una curva
estándar. Dado que los pedestales de NanoDrop One pueden medir concentraciones
proteínicas más altas que los espectrofotómetros tradicionales de cubeta, puede que necesite
suministrar sus patrones de proteínas propios con concentraciones más altas que las
proporcionadas por el fabricante. Por ejemplo, con otros patrones puede ser necesario
asegurarse de que la curva estándar cubra el rango dinámico del ensayo y el rango esperado de
muestras desconocidas.
Trabajo con curvas estándar
El análisis colorimétrico de proteínas requiere una curva estándar.
104 Guía del usuario de NanoDrop One
• Cada experimento necesita una curva estándar nueva.
• Prepare los patrones y las muestras desconocidas del mismo modo. Consulte las pautas y
recomendaciones del fabricante del kit.
– Todas las soluciones de referencia y patrones deben contar con el mismo tampón
para resuspender las muestras y el mismo volumen de reactivo agregado a las
muestras.
– El primer patrón constituye la medición de referencia. La solución de referencia no
debe contener ninguno de los analitos de interés (la medición de la referencia no es la
misma que la de un blanco. Esta aplicación necesita ambas).
– El intervalo de concentraciones de los patrones debe cubrir el rango dinámico del
ensayo y el rango esperado de muestras desconocidas. Las concentraciones de analitos
de la muestra no se extrapolan más allá de la concentración del patrón más elevado.
• Utilice la pantalla de configuración de la aplicación para introducir valores de
concentración para los patrones y especificar cómo se medirán estos y las muestras
(número de réplicas, etc.).
– Según el ajuste de Tipo de
o más patrones.
– El software requiere la medición de una referencia y permite hasta 7 patrones.
– Los valores de concentración de los patrones se pueden introducir en cualquier
orden, pero los patrones deben medirse en el orden en que se introdujeron; en
cualquier caso, las mejores prácticas recomiendan medir los patrones desde la
concentración más baja de la solución madre de analitos del patrón hasta la más alta.
curva, se puede generar una curva estándar a partir de uno
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