Cálculos De Mediciones De Proteínas De A280 - Thermo Scientific NanoDrop One Guia Del Usuario

Medición de Proteínas de A280
Cálculos de mediciones de Proteínas de A280
La aplicación Proteínas de A280 utiliza la
Beer-Lambert para correlacionar absorbancia y
concentración. Resolver la ley de Beer para la
concentración produce la ecuación de la derecha.
El coeficiente de extinción de un péptido o proteína está
relacionada con su composición de aminoácidos:
triptófano (W), tirosina (Y) y cisteína (C).
Sugerencia: El coeficiente de extinción tiene una
longitud de onda específica para cada proteína y puede
verse afectado por el tipo de tampón, la fuerza iónica y
el pH.
76 Guía del usuario de NanoDrop One
ecuación Ecuación de Beer-Lambert (resuelta para concentración)
c = A / (
donde:
A = absorbancia UV en unidades de absorbancia (AU)
ε
= coeficiente de absortividad molar dependiente de longitud de onda (o
coeficiente de extinción) expresado en litro/mol-cm
b = camino óptico en cm
c = concentración de analitos en moles/litro o molaridad (M)
Nota: Al dividir la absorbancia medida de una solución de muestra por su
coeficiente de extinción molar se obtiene la concentración molar de la
muestra. Consulte
información sobre los valores de concentración molar y másica.
Coeficientes de extinción de proteínas
A 280 nm, el coeficiente de extinción se estima por la suma ponderada de
los coeficientes de extinción molar a 280 nm de los tres aminoácidos
incluidos, como se describe en esta ecuación:
ε
= (nW * 5500) + (nY * 1490) + (nC * 125)
donde:
ε
= coeficiente de extinción molar
n
= número de cada residuo de aminoácido
5500, 1490 y 125
ε
* b)
Coeficientes de extinción publicados
= absortividades molares de los aminoácidos a 280 nm
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