Thermo Scientific NanoDrop One Guia Del Usuario página 76

Medición de Proteínas de A280
Ajustes de Proteínas de A280
La aplicación Proteínas de A280 proporciona diversas opciones de tipos de muestras para el
análisis de proteínas purificadas.
Cada tipo de muestra aplica un coeficiente de extinción exclusivo en los cálculos de proteínas.
Si se conoce el coeficiente de extinción de la muestra, elija la opción
(masa) e introduzca el valor. De lo contrario, calcula el coeficiente de extinción y elija la
opción más idónea para la solución de la muestra. Si solo necesita obtener una estimación
aproximada de la concentración proteínica y se desconoce el coeficiente de extinción de la
muestra, seleccione la opción de tipo de muestra 1 Abs=1 mg/ml.
Ajuste Opciones disponibles
Tipo de 1 Abs = 1 mg/ml
a
muestra
BSA
IgG
70 Guía del usuario de NanoDrop One
Sugerencia Lo ideal sería determinar empíricamente el coeficiente de extinción
utilizando una solución de la proteína de interés con una concentración conocida que
utilice el mismo tampón.
Coeficiente ext. másica
(l/gm-cm)
Referencia general
6,67
13,7
ε
+ MW (molar) o
Descripción
Recomendada cuando se desconoce el coeficiente de
extinción y es aceptable la estimación aproximada de
concentración proteínica de una solución sin
interferencia de otras sustancias. Se presupone que la
solución de proteína al 0,1 % (1 mg/ml) produce 1,0 A a
280 nm (con camino óptico de 10 mm), es decir
ε
1 % = 10.
Calcula la concentración proteínica de BSA (albúmina
de suero bovino) con un coeficiente de extinción másica
ε
( ) de 6,67 l/gm-cm a 280 nm para una solución de
BSA al 1 % (es decir, 10 mg/ml). Suponiendo que el
MW es de 66.400 Dalton (Da), el coeficiente de
extinción molar a 280 nm de la BSA es
aproximadamente de 43.824 M
Idóneo para la mayoría de anticuerpos de mamíferos
(es decir, inmunoglobulina G o IgG). Calcula la
concentración proteínica usando un coeficiente de
ε
extinción másica ( ) de 13,7 l/gm-cm a 280 nm para
una solución IgG al 1 % (es decir, 10 mg/ml).
Suponiendo que el MW es de 150.000 Da, el coeficiente
de extinción molar a 280 nm de IgG es
aproximadamente de 210.000 M
ε
1 %
-1 -1
cm .
-1 -1
cm .
Thermo Scientific