Cálculos De Mediciones De Adn Oligo Y Arn Oligo - Thermo Scientific NanoDrop One Guia Del Usuario

Medición de ADN oligo o ARN oligo
Cálculos de mediciones de ADN oligo y ARN oligo
Como en las otras aplicaciones de ácidos nucleicos, las
aplicaciones Oligo utilizan la ecuación Beer-Lambert
para correlacionar absorbancia y concentración a partir
del coeficiente de extinción y el camino óptico de la
muestra. Como los oligonucleótidos son moléculas
monocatenarias cortas (o moléculas más largas de
secuencias repetidas), su espectro y coeficiente de
ε
extinción ( ) son bastante dependientes de la
composición y secuencia de las bases.
(Los factores y coeficientes de extinción generalmente
aceptados para ADN y ARN monocatenarios
proporcionan una estimación razonable para las
secuencias naturales, esencialmente aleatorias, pero no
para las cortas secuencias de oligos sintéticos.) Con el
fin de asegurar unos resultados lo más exactos posible,
para calcular la concentración de oligonucleótidos
ε
utilizamos el valor exacto de
El software de NanoDrop permite especificar la
secuencia de bases de un oligonucleótido antes de
medirlo. El software utiliza la ecuación de la derecha
para calcular el coeficiente de extinción de todas las
secuencias de bases introducidas.
Sugerencia: El coeficiente de extinción tiene una
longitud de onda específica para cada oligonucleótido y
puede verse afectado por el tipo de tampón, la fuerza
iónica y el pH.
60 Guía del usuario de NanoDrop One
.
260
Coeficientes de extinción de oligonucleótidos
El software utiliza el método del vecino más próximo y la siguiente fórmula
para calcular los coeficientes de extinción molar de las secuencias de bases
de oligonucleótidos:
ε 260
=
donde:
ε
= coeficiente de extinción molar en l/mol-cm
ε ε
1 =
ε ε
vecino más próximo
2 =
ε ε
bases individuales
3 =
modificaciones, como colorantes fluorescentes
– –
N 1 N 1 N
  
ε 1 ε 2 ε 3
– +
1 2 1
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