Cálculos De Mediciones De Proteínas Y Marcadores - Thermo Scientific NanoDrop One Guia Del Usuario

Medición de Proteínas y marcadores
Cálculos de mediciones de Proteínas y marcadores
Como en otras aplicaciones de proteínas, Proteínas y
marcadores utiliza la ecuación Beer-Lambert
correlacionar absorbancia y concentración a partir del
coeficiente de extinción y el camino óptico de la
muestra.
Esta aplicación ofrece seis opciones (mostradas a la
derecha) para seleccionar un coeficiente de extinción
adecuado para cada muestra medida y utilizarlo junto
con la ley de Beer en el cálculo de concentración de la
muestra.
Si se conoce el coeficiente de extinción de la muestra,
ε
elija la opción + MW (molar) o
introduzca el valor. De lo contrario, calcula el coeficiente
de extinción y elija la opción más idónea para la solución
de la muestra.
Sugerencia: Lo ideal sería determinar empíricamente el
coeficiente de extinción utilizando una solución de la
proteína de interés con una concentración conocida que
utilice el mismo tampón.
Las concentraciones proteínicas calculadas se basan en
el valor de absorbancia a 280 nm, el coeficiente de
extinción seleccionado (o introducido) y el camino óptico
de la muestra. Podría aplicarse una corrección de línea
base de punto único (o una corrección de análisis).
La concentración se proporciona en unidades de masa.
En Internet se pueden encontrar calculadoras que
convierten las unidades de concentración másica a molar
a partir de la secuencia de la muestra.
90 Guía del usuario de NanoDrop One
Opciones disponibles para el coeficiente de extinción
para
ε
1 % (masa) e
Nota: Consultar detalles en
Valores medidos
Absorbancia de A280
Nota: El valor de absorbancia a 750 nm se resta de todas las longitudes de
onda del espectro. Como resultado, la absorbancia a 750 nm será cero en el
espectro mostrado. Además, para las mediciones de absorbancia en
microvolúmenes y las mediciones tomadas en cubetas no estándar (las que
no son de 10 mm), los espectros se normalizan en un camino óptico
equivalente de 10 mm.
• 1 Abs = 1 mg/ml, donde el tipo de muestra y/o el coeficiente de
extinción no se conocen (produce una estimación aproximada de la
concentración proteínica).
• BSA (albúmina de suero bovino; 6,67 l/gm-cm)
• IgG (cualquier anticuerpo de mamífero; 13,7 l/gm-cm)
• Lisozima (lisozima de clara de huevo; 26,4 l/gm-cm)
ε
• Otras proteínas ( + MW), coeficiente de extinción molar
especificado por el usuario
ε
• Otras proteínas ( 1 %), coeficiente de extinción másico especificado
por el usuario
• Los valores de absorbancia de las proteínas se miden a 280 nm con el
espectro normalizado y corregido a 750 nm. Cuando Corrección de
análisis y Corrección de colorante no están seleccionados, este es el
valor de A280 proporcionado y el valor utilizado para calcular la
concentración proteínica.
• Cuando Corrección de análisis
valor de absorbancia corregida del análisis a 280 nm y normalizada
corregida a 750, que se utiliza para calcular la concentración proteínica.
• Cuando se utiliza un colorante, se proporciona el valor de absorbancia
corregida del colorante a 280 nm y normalizada y corregida del análisis
a 750, que se utiliza para calcular la concentración proteínica.
Tipo de muestra.
está seleccionado, se proporciona el
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