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(AVE) o utilice una concentración diferente de solución madre. El volumen total
de la solución de ARN transportador y tampón de elución (CARRIER–AVE) por
muestra debe ser de 60 µl, de los cuales 50 µl se transfiere a la mezcla de lisis.
El uso de diferentes cantidades de ARN transportador (CARRIER) deberá
validarse para cada tipo concreto de muestra y ensayo posterior.
Uso de un control interno (IC)
Utilizando el kit EZ1 DSP Virus en combinación con sistemas de amplificación
disponibles en el mercado puede requerir la adición de un control interno (IC)
al procedimiento de purificación para analizar la eficiencia de la preparación
de las muestras.
El control interno de ADN o ARN debe combinarse con solución madre de ARN
transportador (CARRIER) (3,6 µl) en una mezcla. Para cada muestra, la mezcla
de ARN transportador y control interno (CARRIER–control interno) debe tener un
volumen de 60 µl, de los cuales 50 µl se transferirán a la mezcla de lisis. Esta
cantidad corresponde a 3 µl de solución madre de ARN transportador
(CARRIER) más 47 µl de tampón de elución (AVE) y/o la solución de control
interno.
Nota: Si el control interno es estable en plasma, suero, LCR, orina, muestras
respiratorias, sangre completa, heces, medios de transporte o frotis secos (por
ejemplo, ARN modificado), puede agregarse alternativamente a la muestra
poco antes de comenzar la preparación de la misma.
Consulte las instrucciones del fabricante para determinar la cantidad óptima de
control interno (IC) para aplicaciones posteriores específicas. La utilización de
una cantidad distinta a la recomendada puede reducir la eficiencia de la
amplificación. Para determinar la cantidad de control interno (IC) necesaria
para el protocolo EZ1 DSP Virus, es necesario tener en cuenta el volumen del
eluido. Véase "Apéndice B: Cálculo de la cantidad de control interno", página
65, para instrucciones detalladas sobre cómo calcular el volumen correcto del
control interno (IC).
Los controles internos (IC) no están incluidos en el kit EZ1 DSP Virus.
Volúmenes de elución y manipulación de los eluidos
El paso final de la purificación es la elución de los ácidos nucleicos virales y del
ADN bacteriano en un volumen final de 60 µl, 90 µl, 120 µl, o 150 µl. Si el
material de la muestra está compuesto por heces, recomendamos utilizar un
volumen de elución de 120–150 µl.
Si los eluidos obtenidos de las heces están turbios, centrifugue a velocidad
máxima (20 000 x g) durante 3 minutos ± 30 segundos para aclararlos. Este
tratamiento mejorará el rendimiento de los eluidos turbios en las aplicaciones
posteriores.
Manual de uso del kit EZ1 DSP Virus 03/2015
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