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Procedimiento
El ARN total debe purificarse a partir de 10 ml de sangre total periférica
recogida en tubos con EDTA.
Compruebe que los reactivos que deben utilizarse para la lisis de
eritrocitos, el aislamiento de ARN y la concentración de ARN no están
caducados y se han transportado y almacenado en las condiciones
adecuadas.
Utilice el kit RNeasy Midi (QIAGEN, n.º de referencia 75144) y el tampón
para lisis de eritrocitos (QIAGEN, n.º de referencia 79217) para la
purificación de ARN a partir de sangre total periférica.
Protocolo de lisis de eritrocitos para el aislamiento de leucocitos
totales a partir de sangre total
Este protocolo está diseñado para el aislamiento de leucocitos totales a partir
de 10 ml de sangre total humana utilizando el tampón para lisis de eritrocitos
(n.º de referencia 79217).
Nota: este protocolo no está indicado para el uso de muestras de sangre total
congeladas.
Notas importantes antes de comenzar
La sangre y los fluidos corporales de todos los seres humanos se consideran
potencialmente infecciosos. Por este motivo, durante la manipulación de
sangre total deben adoptarse todas las precauciones necesarias recomen-
dadas por la FDA (Food and Drug Administration) en EE.UU., la ley federal
para la prevención de enfermedades infecciosas (Bundesseuchengesetz) en
Alemania o las autoridades nacionales competentes en el país de uso.
El tampón RLT puede formar un precipitado durante el almacenamiento.
En caso necesario, caliéntelo para disolverlo y, a continuación, permita
que alcance la temperatura ambiente.
El paso de lisis de eritrocitos debe realizarse sobre hielo.
Los pasos de centrifugación 3 y 5 de este protocolo deben efectuarse
a 4 °C en una centrífuga de laboratorio estándar.
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Manual del kit ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR 12/2014
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