Qiagen ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR Manual página 37

Nota: debe detectarse la dilución estándar de SP1 (plásmido BCR-ABL1,
10 copias) para establecer la curva estándar de BCR-ABL Mbcr.
Número de copias (CN)
Debe utilizarse la ecuación de las curvas estándar de ABL1 o BCR-ABL1 Mbcr
para transformar valores de C
ABL1 o la mezcla para qPCR Mbcr para las muestras no conocidas) en
números de copias para ABL1 o BCR-ABL1 (ABL1
Log muestra ABL1
10
Log muestra
10
BCR-ABL1 Mbcr
CN
Control de calidad para todos los valores de ABL1
Una calidad deficiente del ARN o posibles problemas durante el proceso de
qPCR de la transcripción inversa pueden ser causa de números de copias bajos
para ABL1.
Para conseguir una sensibilidad óptima de la prueba, el número de copias de
ABL1 debe ser mayor o igual que 100.000 para el control positivo alto de
ARN, el control positivo bajo de ARN y el calibrador IS-MMR.
Control negativo de TI y control de agua
El control sin molde (NTC) para el paso de PCR (control de agua) y el paso de
transcripción inversa (control negativo de TI) deberían generar un CN igual
a cero tanto para ABL1 como para BCR-ABL1 Mbcr. Por tanto, no se debería
obtener ningún valor de C
sección de las curvas estándar, respectivamente. Un resultado positivo para los
controles NTC indica contaminación cruzada durante la transcripción inversa
y/o la qPCR.
Manual del kit ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR 12/2014
iniciales (obtenidos con la mezcla para qPCR
T
C medio para ABL – intersección de la
T
=
CN
Pendiente de la curva estándar de ABL
C medio para BCR-ABL1-Mbcr – intersección
T
de la curva estándar de BCRABL1-Mbcr
=
Pendiente de la curva estándar
o el valor de C
T
o BCR-ABL1 Mbcr
CN
curva estándar de ABL1
de BCR-ABL1 Mbcr
NC
debería ser superior a la inter-
T
).
CN
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