Procedimiento
1. Incube 15 µl de cada muestra, controles positivos (controles positivos alto
y bajo), agua (utilizada para generar el control negativo de TI) y calibrador
IS-MMR durante 5 minutos a 65 °C. A continuación, enfríelos de inmediato
con hielo durante 5 minutos como mínimo.
2. Centrifugue brevemente (aproximadamente 5 segundos) para depositar el
líquido en el fondo del tubo. A continuación, consérvelos en hielo.
3. Prepare la siguiente mezcla de TI según el número de muestras, controles
y calibradores que vayan a procesarse (tabla 1).
Tabla 1. Preparación de la mezcla de TI
Componente
Mezcla de TI, 3,33×
Transcriptasa inversa, 10×
Volumen final de mezcla de TI
(para añadir en el paso 4)
Muestra, controles positivos,
calibrador IS-MMR o agua
(del paso 1)
Volumen total
Nota: el volumen final por reacción debe ser de 25 µl.
4. Pipetee 10 µl de mezcla de TI en cada tubo etiquetado que contenga
muestra de ARN, controles positivos, agua o calibrador (del paso 3).
5. Mezcle bien pipeteando hacia arriba y abajo 10 veces y centrifugue
brevemente (aproximadamente 5 segundos) para depositar el líquido
en el fondo del tubo.
Nota: vuelva a colocar todos los reactivos para transcripción inversa del
kit ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR en el congelador después de
preparar las reacciones para evitar la degradación de los materiales.
26
Volumen por
muestra (µl)
7,5
2,5
10
15
25
Manual del kit ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR 12/2014
Mezcla de TI:
12 + 1 reacciones
(µl)
97,5
32,5
130
15 en cada una
25 en cada una
Concentración
final
1×
1×
–
–
–