Qiagen ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR Manual página 31

Tabla 4. Preparación de la mezcla maestra (master mix) de PCR
Componente
Mezcla para qPCR
(mezcla para qPCR ABL1
o para qPCR Mbcr)
ADN polimerasa Taq
Muestra, estándar, control
o calibrador IS-MMR
(añadir en el paso 3)
Volumen total
2. Dispense 20 µl de premezcla para qPCR en cada tubo de 0,1 ml del equipo
Rotor-Gene Q.
3. Añada 5 µl de producto de TI (ADNc) obtenido en las transcripciones
inversas (consulte "Transcripción inversa", en la página 25), estándares,
controles o calibrador IS-MMR de acuerdo con la distribución de las
muestras, tal como se indica en la ilustración 3 (volumen total de 25 µl).
4. Mezcle suavemente pipeteando arriba y abajo.
5. Coloque los tubos en el adaptador suministrado con el equipo.
6. Deben colocarse tubos vacíos en las posiciones no ocupadas.
7. Coloque el anillo de fijación sobre los tubos y presiónelo para encajarlo.
8. Cargue el adaptador lleno en el equipo Rotor-Gene Q MDx.
9. Programe el equipo Rotor-Gene Q MDx mediante el programa de ciclado
tal como se indica en la tabla 5.
Nota: vuelva a colocar todos los componentes del kit ipsogen BCR-ABL1
Mbcr RGQ RT-PCR en el congelador para evitar la degradación de los
materiales.
Manual del kit ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR 12/2014
Premezcla ABL1
1 reacción 34 + 2 reacciones (µl)
19,75
0,25
5 5 en cada una
25 25 en cada una
o Mbcr: Concentración
711
9
final
1×
1×
–
–
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