Qiagen ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR Manual página 32

Tabla 5. Perfil de temperatura
Modo de análisis
"Hold 1" (Pausa 1)
"Cycling" (Ciclado)
10. Haga clic en "Gain Optimisation" (Optimización de ganancia) en el cuadro
de diálogo "New Run Wizard" (Asistente para series nuevas) para abrir el
cuadro de diálogo "Auto-Gain Optimisation Setup" (Configuración de la
optimización de ganancia automática). Compruebe que el rango para el
canal verde sea de "5 Fl" para "Min Reading" (Lectura mínima) a "10 Fl"
para "Max Reading" (Lectura máxima) y que el rango de ganancia
aceptable sea de –10 a 10.
11. Revise que la casilla "Perform Optimisation Before 1st Acquisition" (Ejecutar
la optimización antes de la primera adquisición) esté marcada y cierre el
cuadro de diálogo "Auto-Gain Optimisation Setup" (Configuración de la
optimización de ganancia automática).
12. Inicie el programa de termociclado.
13. Cree los dos subtipos ABL1 y Mbcr en la ventana "Edit samples" (Editar
muestras).
14. Cuando finalice el termociclado, seleccione "Options" (Opciones) y "Crop
Start Cycles" (Borrar ciclos de inicio). Elimine los datos anteriores al ciclo 10.
A continuación, seleccione "Analysis" (Análisis) y "Cycling A. Green
from 10" (Ciclado A. Verde a partir de 10), indicado en el informe como
"left threshold = 10.00" (umbral izquierdo = 10,00).
15. Proceda del modo siguiente para ABL1 y Mbcr:
Si se abre la ventana "Calculate Automatic Threshold" (Calcular umbral

automático), seleccione "Cancel" (Cancelar).
Defina el umbral en 0.03 (en la parte derecha inferior de la ventana).

Seleccione "Dynamic Tube" (Tubo dinámico) como método de

normalización en el informe y "Slope Correct" (Pendiente correcta) para
corregir el ruido de la pendiente.
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Cuantificación
Temperatura: 95 °C
Tiempo: 15 min
50 ciclos
94 °C; 15 s
60 °C; 60 s con adquisición de fluorescencia FAM
en el canal verde
Manual del kit ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR 12/2014