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Concentración de ARN (paso opcional)
Este protocolo se ha optimizado para realizar la concentración de ARN.
Notas importantes antes de comenzar
No se requiere la digestión de la DNasa puesto que la tecnología de
membrana de sílice RNeasy MinElute elimina eficazmente la mayor parte
de ADN.
El tampón RLT contiene sal de guanidina y, por lo tanto, no es compatible
con reactivos desinfectantes que contengan lejía.
Realice todos los pasos del procedimiento a temperatura ambiente
(15-25 °C). Durante el procedimiento, trabaje con rapidez.
Lleve a cabo todos los pasos de centrifugación a 20-25 °C en una
microcentrífuga estándar. Asegúrese de que la centrífuga no alcanza
una temperatura inferior a 20 °C.
El tampón RLT puede formar un precipitado durante el almacenamiento.
En caso necesario, caliéntelo para disolverlo y, a continuación, permita
que alcance la temperatura ambiente (15-25 °C).
Antes de comenzar
Prepare 500 µl de etanol al 80% por cada muestra de ARN que se deba
concentrar.
El tampón RPE se suministra como concentrado. Antes de utilizarlo por
primera vez, añada 4 volúmenes de etanol (96-100%), tal como se indica
en la botella, para obtener una solución de trabajo.
Permita que las columnas alcancen la temperatura ambiente antes de
comenzar.
Mida el volumen de las muestras que se utilizarán y ajústelo de modo que
el volumen de muestra final sea de 200 µl.
Procedimiento
1. Después de ajustar el volumen de la muestra a 200 µl con agua libre de
RNasa, añada 700 µl de tampón RLT y mezcle bien.
2. Añada 500 µl de etanol al 96-100% al ARN diluido y mezcle bien mediante
pipeteo. No centrifugue la mezcla. Continúe de inmediato por el paso 3.
Manual del kit ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR 12/2014
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