Qiagen ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR Manual página 24

3. Transfiera un máximo de 700 µl de la muestra a una columna de
centrifugado RNeasy MinElute situada en un tubo de recogida de 2 ml
(suministrado). Cierre la tapa con suavidad y centrifugue durante
15 segundos a ≥ 8.000 × g (≥ 10.000 rpm). Deseche el flujo continuo.
Transfiera la muestra restante (hasta 700 µl) y repita la centrifugación.
Deseche el flujo continuo.
Nota: el flujo continuo contiene tampón RLT, por lo que no es compatible
con la lejía. Consulte "Advertencias y precauciones", en la página 13,
para obtener información de seguridad.
4. Sitúe la columna de centrifugado RNeasy MinElute en un tubo de recogida
de 2 ml nuevo (suministrado).
5. Añada otros 500 µl de tampón RPE a la columna de centrifugado. Cierre
la tapa con suavidad y centrifugue durante 15 segundos a ≥ 8.000 × g
(≥ 10.000 rpm) para lavar la membrana de la columna de centrifugado.
Deseche el flujo continuo.
Nota: el tampón RPE se suministra como concentrado. Asegúrese de que se
ha añadido etanol al tampón RPE antes de utilizarlo.
Reutilice el tubo de recogida en el paso 6.
6. Añada 500 µl de etanol al 80% a la columna de centrifugado RNeasy
MinElute. Cierre la tapa con suavidad y centrifugue durante 2 minutos
a ≥ 8.000 × g (≥ 10.000 rpm) para lavar la membrana de la columna
de centrifugado. Descarte el flujo continuo y el tubo de recogida.
Nota: el flujo continuo contiene tampón RLT, por lo que no es compatible
con la lejía.
Nota: después de la centrifugación, retire con cuidado la columna de
centrifugado RNeasy MinElute del tubo de recogida para que no entre
en contacto con el flujo continuo. De lo contrario, se podría producir
una contaminación por arrastre de etanol.
7. Sitúe la columna de centrifugado RNeasy MinElute en un tubo de recogida
de 2 ml nuevo (suministrado).
8. Abra la tapa de la columna de centrifugado y centrifugue a máxima
velocidad durante 5 minutos. Descarte el flujo continuo y el tubo de
recogida.
9. Para evitar el deterioro de las tapas de las columnas de centrifugado, sitúe
las columnas de centrifugado en la centrífuga con al menos una posición
vacía entre las columnas. Coloque las tapas de modo que estén orientadas
hacia la dirección opuesta a la rotación del rotor (p. ej., si el rotor gira en
el sentido de las agujas del reloj, oriente las tapas en sentido antihorario).
24 Manual del kit ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR 12/2014