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Sección 3
PCR en tiempo real
Teoría de la PCR
Manual de funcionamiento del m2000rt
50-608336/R2—Julio de 2010
La PCR (reacción en cadena de la polimerasa) consiste en una
tecnología comúnmente usada en diagnósticos moleculares
a través de la evaluación cualitativa o cuantitativa de las
secuencias objetivo de ácidos nucleicos en especímenes de
prueba. La PCR amplifica las secuencias de ADN a través del
uso de reactivos que contienen secuencias de oligonucleótidos
específicos al objetivo (o cebadores), bases trifosfato de ácidos
nucleicos individuales y enzimas polimerasas. (Primero,
las secuencias objetivo de ARN se deben convertir en
secuencias de ADNc [ADN complementario] antes de
poder producirse PCR.)
Sometiendo a la mezcla de reacción a un ciclo entre
temperaturas altas y bajas (permutación cíclica térmica),
estos reactivos copian la secuencia objetivo de ácido nucleico.
Lo ideal es que, después de cada ciclo, la concentración de la
secuencia objetivo se duplique. En el curso de 30 ciclos o más,
el objetivo original se puede amplificar más de mil millones de
veces. Una pequeñísima copia de una secuencia en particular
se puede amplificar y detectar específicamente a través de
la PCR. Varias secuencias objetivo se pueden amplificar en
la misma reacción incluyendo la combinación correcta
de secuencias de cebadores oligonucleótidos específicos
al objetivo.
Principios de funcionamiento
PCR en tiempo real
3-3
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