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Principios de funcionamiento
PCR en tiempo real
3-8
CT: Determinación del ciclo de umbral
Cálculo y cuantificación del número de ciclo
El parámetro C
(ciclo de umbral) se define como el número
T
fraccionario de ciclo en el cual la curva de crecimiento
de fluorescencia de PCR aumenta una cantidad fija sobre
el nivel de fluorescencia de referencia. Para realizar esta
determinación, se identifica la región de referencia, y se
eliminan la pendiente y el desplazamiento para generar una
respuesta de amplificación de referencia. Esta respuesta se
compara con un umbral fijo para determinar el valor de C
Este análisis supone que, para todas las intensidades
de fluorescencia de referencia a nivel del umbral, se
presenta la misma cantidad de objetivo amplificado.
Figura 3.2:
Línea de amplificación de referencia
La ecuación de crecimiento de la PCR en la fase exponencial
del ciclo N es:
[producto de PCR objetivo]
•
[objetivo]
corresponde a la concentración de la muestra
0
objetivo antes de la amplificación.
•
El rendimiento corresponde al rendimiento promedio
de amplificación a través de N ciclos térmicos.
Muestra
C
Sin control de plantilla
T
= [objetivo]
x (1 + rendimiento)
N
0
Manual de funcionamiento del m2000rt
50-608336/R2—Julio de 2010
Sección 3
.
T
Umbral
N
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