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Principios de funcionamiento
PCR en tiempo real
3-4
La PCR muestra tres fases de crecimiento: exponencial, lineal
y meseta. La siguiente tabla describe lo que ocurre en cada fase:
Tabla 3.1:
Fases de la ejecuciónde la PCR
Fase de ejecución
Exponencial
Lineal
Meseta
En teoría, siempre que la PCR amplifique eficazmente las
secuencias objetivo (fase exponencial), existe una relación
cuantitativa entre la cantidad de secuencia objetivo inicial
y la cantidad de producto de la PCR en un ciclo determinado.
Durante el curso de la reacción, la cantidad de objetivo
producido se vuelve significativa y comienza a competir
con los cebadores por unirse a la secuencia objetivo
complementaria, lo que hace que la velocidad de la reacción
disminuya. Esto corresponde al inicio de la fase lineal.
Al continuar la reacción, los reactivos comienzan a limitarla,
lo que corresponde al inicio de la fase de meseta. De esta
forma, la cinética de la PCR se traduce en una curva de
crecimiento de la PCR. Si el proceso cinético se modifica
durante el curso de la reacción, como con la inhibición de
la reacción, se refleja en la curva de crecimiento de la PCR.
Normalmente, la inhibición de la PCR ocasiona una demora
en el tiempo de la curva de crecimiento, la supresión de una
respuesta o ambas situaciones.
Descripción
• Duplicación exacta de producto
que se acumula en cada ciclo
(suponiendo un rendimiento
de reacción de un 100%).
• La reacción es específica y precisa.
• La velocidad de reacción
disminuye debido al producto
que se acumula.
• Los componentes de la reacción
se están consumiendo.
• Los reactivos limitantes de
la reacción se están agotando.
• La reacción se completó
efectivamente; no se producen
más productos específicos.
Manual de funcionamiento del m2000rt
50-608336/R2—Julio de 2010
Sección 3
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