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Leica Microsystems Heidelberg GmbH
solo canal de detección. Tras la captura de la imagen, estas señales no pueden diferenciarse unas
de otras en el bloque de datos de la imagen.
(1)
Captura en dos canales de dos tinturas fluorescentes con espectros
de emisión que se solapan entre sí
La ilustración
(1)
muestra el problema de la diafonía. Para una captura de imagen en dos canales de
detección se utilizan dos tinturas fluorescentes cuyos espectros de emisión se solapan. Mientras en
el canal 1 sólo se detecta la emisión de la tintura fluorescente verde, en el canal 2 se solapan las
señales fluorescentes de las tinturas roja y verde. Como consecuencia, no es posible descifrar con
claridad si los datos de la imagen recogidos en el canal 2 proceden de la señal fluorescente verde o
roja.
La diafonía de las señales fluorescentes también puede apreciarse en un diagrama de correlación.
Los diagramas de correlación ilustran la distribución conjunta de dos variables, en la ilustración
estas variables son las señales fluorescentes en los canales de detección 1 y 2. La nube de puntos
de la tintura fluorescente roja se inclina en la dirección de la diagonal de superficie del diagrama ya
que en el canal 2 también se ha recogido una parte determinada de la tintura de fluorescencia verde.
El Leica Confocal Software ofrece un diagrama de correlación de este tipo con el denominado
citofluorograma para una primera interpretación del bloque de datos de la imagen. El citofluorograma
permite visualizar la distribución conjunta de bloques de datos de imágenes con hasta tres canales
de detección (tinturas fluorescentes).
& vea Multicolor / Bidimensional Creación de citofluorograma (página 270)
Las funciones de la reconstrucción en colores (Dye Finder) permiten separar señales fluorescentes
solapadas tras la captura de la imagen con ayuda de diferentes procesos matemáticos:
Función
Descripción
Adaptive Dye
El algoritmo de la separación de tinturas adaptable utiliza un análisis de
Separation
conglomerados para la identificación y separación de señales fluorescentes. No
se precisan datos de referencia de las tinturas fluorescentes utilizadas para la
creación del bloque de datos de la imagen. Esta función puede aplicarse a series
de imágenes espaciales, temporales y series Lambda.
Spectral Dye
El algoritmo de la separación de tinturas espectral realiza una descomposición
Separation
de valores singulares píxel a píxel. Se precisan los datos de referencia de los
espectros de emisión de las tinturas fluorescentes utilizadas para la creación del
bloque de datos de la imagen. Esta función sólo se aplica a series Lambda.
Dimensionality
El algoritmo de la reducción de dimensionalidad se basa en un análisis de
Reduction
componentes principales. Mediante esta función pueden reducirse series
Lambda de varias dimensiones a un menor número de dimensiones, es decir,
imágenes individuales. Esta función sólo se aplica a series Lambda.
Manual Dye
Esta función permite la introducción manual de factores (coeficientes de matriz)
Separation
para reducir o incrementar la información de la señal en cada canal de detección.
Principio de la separación de tinturas adaptable (Adaptive Dye Separation)
Mediante el algoritmo de la separación de tinturas adaptable pueden identificarse y separarse
señales fluorescentes en un bloque de datos sin conocer las tinturas utilizadas. Esto es posible
Manual del usuario de Leica TCS SP2 español
Art. n.º: 159330056 / Vers.: 31102002
Funciones del software LCS:
Descripción de cada función
(2)
Diagrama de
correlación esquemático
de los datos de la imagen
de los canales de
detección 1 y 2
Página 230 de 320
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