Leica TCS SP2 Manual Del Usuario página 9

Leica Microsystems Heidelberg GmbH
Generalidades
del tamaño de una imagen de difracción de un punto minúsculo de la muestra. Corresponde al radio
del primer mínimo de esta imagen de difracción. Esto, a su vez, depende de la apertura numérica del
objetivo y del condensador. La apertura numérica se define mediante el coeficiente de refracción de
la lente y el tamaño del compás de vara que puede penetrar.
De forma análoga a la argumentación anterior, la resolución axial puede definirse como el radio del
primer mínimo a lo largo del eje del microscopio de la imagen de difracción de un objeto puntual. De
acuerdo con la teoría de imágenes de difracción en 3 dimensiones de este tipo, el poder resolutivo a
lo largo del eje z es dos veces menor que el poder resolutivo óptico lateral. De esta forma, la
resolución óptica a lo largo del eje z alcanza aproximadamente la mitad de la resolución del plano
focal.
El microscopio TCS SP2 de LEICA consiste en un sistema de barrido de puntos con gran sensibilidad
y resolución teórica en los ejes x, y, z, que no acepta condiciones.
La resolución de barrido se refiere a la nitidez de enfoque que está determinada por el número y el
tamaño del píxel. Cuanto mayor es el número de píxeles y mayor el formato de barrido seleccionado,
más sencillo resulta distinguir entre dos objetos próximos entre sí. La resolución de barrido está
limitada por el poder resolutivo óptico máximo.
Detección
La formación de imágenes confocales, es decir, la medición de las características ópticas de
cantidades muy pequeñas de una muestra no está limitada únicamente por la calidad óptica del
microscopio. Otras limitaciones son:
- El hecho de que las muestras continuas se miden (debido a la toma de muestras y al procesamiento
digital) sólo en pequeñas cantidades individuales de muestra.
- La exactitud con la que se definen estas pequeñas cantidades, que se determina mediante el
mecanismo de barrido.
- La potencia de la fuente de luz en relación con el potencial de reflexión de la muestra.
- La sensibilidad y el ruido del detector.
También el detector es un componente central del microscopio confocal. Debido a su elevada
relación entre señal y nivel de ruido, LEICA Microsystems Heidelberg utiliza fotomultiplicadores como
detectores.
Edición de imagen
En los primeros microscopios confocales, el detector estaba conectado a un osciloscopio con
fosforescencia y la imagen se mostraba de la forma en que se producía el barrido. En la actualidad,
en primer lugar se procesa la señal digitalmente y después se muestra en un ordenador. De esta
forma existe la posibilidad de modificar la imagen mostrada de diferentes formas. Las posibilidades
son las siguientes:
- Incremento del contraste mediante valores umbral, extensión de contraste lineal y la corrección
Gamma (curva del valor de intensidad de la imagen frente a la representación gráfica de la intensidad
de la fuente).
- Doble exposición de imágenes en experimentos.
- Filtro digital para la ampliación de los bordes, el alisado, la eliminación de interferencias, etc.
- Reconstrucción de vistas tridimensionales con ayuda de cortes ópticos recogidos en lotes de
imágenes. Esto permite, por ejemplo, la reconstrucción de una imagen en un plano xz mediante lotes
de imágenes de planos xy. Al mismo tiempo, pueden generarse modelos tridimensionales completos
de la muestra y examinarse desde cualquier dirección.
- Composición de películas digitales mediante las series temporales tomadas con el microscopio.
- Cuantificación y mediciones
Este tipo de edición de imágenes no incrementa la calidad de los datos recogidos; sin embargo,
permite mejorar la vista y facilitar la interpretación cualitativa de los datos.
Fuente luminosa
El láser se adapta como fuente luminosa de forma excepcional a la microscopía confocal, ya que
proporciona una luz muy clara y el rayo presenta una desviación muy pequeña. Al mismo tiempo, su
enfoque es sencillo y su intensidad muy estable. Precisamente esta estabilidad cobra especial
importancia en las mediciones cuantitativas.
Manual del usuario de Leica TCS SP2 español
Art. n.º: 159330056 / Vers.: 31102002
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