Leica TCS SP2 Manual Del Usuario página 306

Leica Microsystems Heidelberg GmbH
Deformación del
campo de imagen
Desplazamiento de
Stokes
Distancia de
trabajo
Filtro de paso
corto
Filtro de paso
largo
Filtro dicroico
Filtro dicroico
doble
Filtro dicroico
triple
Filtro, digital, por
fases
Manual del usuario de Leica TCS SP2 español
Art. n.º: 159330056 / Vers.: 31102002
en lugares ópticamente conjugados de la trayectoria de los rayos. Funcionan
como fuentes de luz puntuales (diafragma de excitación) y como detector
puntual (diafragma de detección). El diámetro del diafragma de detección
determina la longitud de onda y la apertura numérica del objetivo utilizado,
así como la extensión axial de un corte óptico (resolución óptica).
La superficie curvada sobre la que se reproduce con nitidez una imagen
microscópica se denomina deformación del campo de imagen. Está
provocada por la forma convexa de la lente y se percibe como error debido a
la escasa distancia focal de los objetivos de los microscopios. El objeto no se
reproduce con nitidez simultáneamente en el centro y en la periferia. Los
objetivos que tienen una corrección de la deformación del campo de imagen
se denominan objetivos planos (plano = campo de imagen llano).
El desplazamiento de Stokes es uno de los términos principales de la
microscopía de fluorescencia. Si se excitan moléculas fluorescentes con una
luz de una determinada longitud de onda, éstas emiten otra luz con una
longitud de onda mayor. Esta diferencia entre luz de excitación y luz
fluorescente se denomina desplazamiento de Stokes. Sin este
desplazamiento no sería posible la separación de la intensa luz de excitación
de la débil señal fluorescente en un microscopio de fluorescencia.
Distancia de la lente frontal de un objetivo al foco. Para la distancia de
trabajo libre se indica la distancia entre la lente frontal del objetivo y el cubre-
objetos o la muestra descubierta. En la mayoría de los casos, los objetivos
con gran distancia de trabajo poseen una baja apertura numérica y, por el
contrario, los que tienen gran apertura, disponen de una pequeña distancia.
Si se desea un objetivo de gran apertura con gran distancia de trabajo, debe
ampliarse el diámetro de la lente del objetivo. Con frecuencia se trata de
ópticas con baja corrección, ya que lograr la extrema precisión en la
fabricación de una lente de gran diámetro sólo es posible con gran esfuerzo.
Los filtros de paso corto son filtros de interferencia que transmiten luz de
onda corta y reflejan la de onda larga. Este tipo de filtro se caracteriza por la
especificación del límite de la longitud de onda en el que el filtro pasa de
transmisión a reflexión (50% umbral).
Los filtros de paso largo son filtros de interferencia que reflejan la luz de onda
corta y son transparentes para la de onda larga. Este tipo de filtro se
caracteriza por la especificación del límite de la longitud de onda en el que el
filtro pasa de reflexión a transmisión (50% umbral).
Los filtros dicroicos son filtros de interferencia con un ángulo de incidencia de
la luz de 45°. La transmisividad o la reflectividad de estos filtros depende de
una determinada longitud de onda de la luz. Con un filtro de paso corto
510 (reflection short pass), por ejemplo, se refleja la luz de excitación por
debajo de 510 nm y se transmite por encima de este valor. Los valores de
transmisión se encuentran generalmente entre el 80% y el 90%, y los valores
de reflexión entre el 90% y el 95%.
Los filtros dicroicos dobles son filtros de interferencia con un ángulo de
incidencia de la luz de 45°. La transmisividad o la reflectividad de estos filtros
dobles depende de dos determinadas longitudes de onda de la luz. Con un
filtro Dicroico doble DD 488/568, por ejemplo, se refleja la luz de excitación a
488 nm y 568 nm y se transmite por encima de estos valores. Los valores de
transmisión son generalmente del 80%, y los valores de reflexión se
encuentran entre el 90% y el 95%.
Los filtros dicroicos triples son filtros de interferencia con un ángulo de
incidencia de la luz de 45°. La transmisividad o la reflectividad de estos filtros
triples depende de tres determinadas longitudes de onda de la luz. Con un
filtro dicroico triple TD 488/568/647, por ejemplo, se refleja la luz de
excitación a 488 nm, 568 nm y 633 nm y se transmite por encima de estos
valores. Los valores de transmisión son generalmente del 80%, y los valores
de reflexión se encuentran entre el 90% y el 95%.
Un filtro digital consta de un procedimiento de cálculo que permite la
modificación de los datos de la imagen. Mediante los filtros se intenta
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