Análisis De Los Datos De Hrm - Qiagen Rotor-Gene Q MDx Manual Del Usuario

3. Utilice la opción Comparative Quantitation (Cuantificación comparativa) de la ventana Analysis
(Análisis) para obtener la eficacia de reacción de cada muestra. Si la eficacia no es similar a
la de las demás reacciones en el experimento o es inferior a 1,4, la reacción deberá excluirse
por constituir un valor atípico.
Resultados de cuantificación comparativa. La eficacia de reacción se muestra en la columna "Amplification" (Amplificación)
como una puntuación sobre 2 (2 = 100 % de eficacia).
Nota: Si sospecha que puede haber dímeros de cebador o productos no específicos, evalúe
las reacciones generando un gráfico derivativo con la opción Melt (Disociación) de la ventana
Analysis (Análisis). Asegúrese de que hay un único pico, lo que indica que se trata de un único
producto. Si es posible, aplique un gel para comprobar que solo hay un producto de
amplificación. Si hubiera más de un producto, la reacción deberá repetirse o reoptimizarse.
10.9 Análisis de los datos de HRM
Los análisis de HRM habilitan la identificación visual y automática de genotipos. Los resultados
pueden verse como gráfico de disociación normalizado o como gráfico de diferencias. Las curvas
normalizadas proporcionan la representación básica de los distintos genotipos según el
desplazamiento de la curva (para homocigotos) y el cambio de forma de esta (para heterocigotos).
Los gráficos de diferencia resultan útiles a la hora de llevar a cabo una interpretación visual.
En ellos se representa la diferencia en la fluorescencia de una muestra respecto a un control
seleccionado en cada transición de temperatura. Los gráficos de diferencia ofrecen una perspectiva
alternativa de las diferencias entre las transiciones de curva de disociación.
Manual del usuario de Rotor-Gene Q MDx CE 02/2022 190