Qiagen Rotor-Gene Q MDx Manual Del Usuario página 61

Cuando el tubo de referencia ha alcanzado el nivel de fluorescencia del umbral de
desnaturalización, el instrumento se enfría de inmediato y procede con el siguiente paso
programado del ciclo. Los picos no se calculan durante el ciclado. Por el contrario, el nivel de
fluorescencia toma como referencia el pico de disociación, que es lo que designa el umbral de
desnaturalización.
En el siguiente gráfico, las lecturas de fluorescencia sin procesar y la primera derivada se han
superpuesto. Esto muestra la correspondencia entre el umbral de desnaturalización y el pico de
disociación obtenido durante la calibración.
1,5
1,25
1
0,75
0,5
0,25
0
Para realizar un ciclado de desnaturalización óptica, se necesita:
Un producto de la PCR preamplificado para colocarlo en la posición 1 del rotor. Esta muestra

debe contener el mismo producto de la PCR que las muestras de interés y una sustancia química
de detección para la monitorización de la disociación del producto de la PCR.
Un perfil desnaturalización óptica. Se puede crear un nuevo perfil o se puede editar un perfil

existente (consulte los detalles a continuación).
Los ciclos de desnaturalización óptica parecen casi idénticos al resto de ciclos. Las principales
diferencias radican en el paso de disociación que se inserta automáticamente al comienzo del
perfil y en el perfil abrupto del paso de desnaturalización durante el ciclado. El ciclo de
desnaturalización óptica no necesita tiempo de retención definidos, ya que la disociación del
producto se monitoriza en cada ciclo.
Manual del usuario de Rotor-Gene Q MDx CE 02/2022
Pico de
disociación
Umbral de
desnaturalización
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