résolution
Persulfate
d'ammonium à 10 %
Versement du gel :
Pour les gels avec concentration :
1. Insérez le peigne dans les plaques de verre et tracez un repère sur les plaques
de verre 1 cm au-dessous de la pointe des dents du peigne. Ce repère indique
l'emplacement où vous devez ajouter le gel de résolution.
2. Ajoutez 70 µl de TEMED à la solution de gel et mélangez correctement en évitant
la formation de bulles d'air.
3. Remplissez les plaques de verre en évitant encore une fois la formation de bulles
d'air. Le remplissage doit être effectué rapidement avant que le TEMED ne rende
le gel trop visqueux.
4. Superposez le gel très délicatement avec 1 ml d'isobutanol, d'isopropanol ou
d'eau distillée. Lors de l'utilisation d'eau distillée, des précautions
supplémentaires doivent être prises pour éviter tout mélange avec la solution
de gel.
5 Laissez le gel de résolution polymériser. Ce processus prend généralement 15
minutes, mais ce délai peut varier en fonction du niveau de fraîcheur des réactifs
utilisés. Si la polymérisation dure plus longtemps, vous devrez alors utiliser des
solutions stock fraîches ou ajouter plus d'APS et de TEMED.
6. Préparez le gel de concentration en vous aidant des valeurs indiquées dans le
tableau 4 ci-dessous. Les solutions stock sont indiquées aux pages 22 et 23.
Tableau 4.
Solution
Eau distillée
Solution stock d'acrylamide à 30 %
700 µl
700 µl
20
700 µl
700 µl
shiroGEL VERTICAL 20
16,8 ml
2,6 ml
700 µl
700 µl