3M Petrifilm 6402 Manual Del Usuario página 39

FÖRVARING OCH AVFALLSHANTERING
Förvara oöppnade påsar med Petrifilm-plattor i kylskåp eller nedfrysta vid en temperatur som är lägre eller lika med 8ºC (46ºF). Låt foliepåsarna
uppnå rumstemperatur innan de öppnas och precis före användning. Lägg tillbaka oanvända plattor i påsen. Försegla påsen genom att vika
kanten och tejpa igen den. För att undvika att plattorna utsätts för fukt, skall förvaring av öppnade förpackningar ej ske i kylskåp. Förvara
återförslutna påsar svalt och torrt i högst en månad. Om temperaturen i laboratoriet överskrider 25°C (77ºF) och/eller laboratoriet är beläget
i ett område med luftfuktighet över 50% (och luftkonditionering inte finns), rekommenderas att återförslutna påsar med Petrifilm-plattor förvaras
i frys (se nedan).
För att förvara öppnade påsar i frys skall Petrifilm-plattorna placeras i en förslutningsbar behållare. När Petrifilm-plattorna skall användas öppnas
behållaren, det önskade antalet plattor tas ut och de återstående plattorna läggs omedelbart tillbaka i behållaren i frysen. Använd inte plattorna
efter utgångsdatum. Den frys som används för öppnade förpackningar får inte ha automatisk avfrostning eftersom detta skulle utsätta plattorna
för fukt som kan skada dem.
Använd ej odlingsplattor som uppvisar brandgul eller brun missfärgning. Utgångsdatum och partinummer är angivet på varje förpackning med
Petrifilm odlingsplattor. Partinummer finns även angivet på varje enskild odlingsplatta.
Efter användning kan Petrifilm RCC-plattorna innehålla mikroorganismer som kan innebära en potentiell biorisk. Hantera och destruera dem därför
enligt gällande rutiner för mikrobiologiskt avfall.
Bruksanvisning
Förberedelse av provet
1. Använd lämpliga sterila spädningsvätskor:
Butterfields fosfatbuffert
destillerat vatten.
Använd inte spädningsmedel som innehåller citrat, bisulfit eller tiosulfat tillsammans med Petrifilm-plattor eftersom de kan
hämma tillväxten. Substituera med en av de buffertar som anges ovan, uppvärmd till 40–45°C (104–113ºF), om citratbuffert indikeras
i standardproceduren.
2. Blanda eller homogenisera provet.
3. För optimal tillväxt och återvinning av mikroorganismerna skall provsuspensionens pH justeras till 6,5–7,5. Sura produkter pH-justeras med
1N NaOH. För alkaliska produkter justeras pH med 1N HCl.
Ympning
1. Placera en Petrifilm RCC-platta på en jämn yta (se figur a).
2. Lyft den översta filmen och dispensera med pipetten vinkelrätt 1 mL provsuspension i mitten av den undre filmen (se figur b).
3. Rulla ned den övre filmen på provet för att förhindra att luftbubblor uppstår (se figur c).
4. Placera spridaren av plast med den platta sidan nedåt på plattans mitt (se figur d). Sprid ut provet jämnt, genom ett försiktigt tryck
på centrum av spridningsplattan. Sprid inokulationsämne över hela Petrifilm-plattans tillväxtområdet innan gelen bildas. Dra ej med
spridningsplattan över filmen.
5. Avlägsna spridningsplattan och låt plattan vila i minst en minut så att gelen hinner stelna.
Inkubering
1. Inkubera plattorna horisontellt, med den genomskinliga sidan uppåt i staplar om högst 20plattor. Flera inkuberingstider och temperaturer
kan användas, beroende på aktuella lokala referensmetoder, av vilka några anges i avsnittet Specifika anvisningar för validerade metoder.
**Se undantag enligt AFNOR avseende inkuberingstemperatur för behandlat fläskkött.
2. Under inkuberingsperioden på 24 ± 2 timmar kan plattorna granskas för koliform växt vid valfri tidpunkt, beroende på önskad information
och vilken metod som används (se beskrivning nedan*). Då växt av koliforma bakterier påverkas av temperaturen, bör tiden utanför
inkubatorn minimeras så att förlängning av detektionstiden undviks.
Tolkning och räkning
För tolkning, se avsnittet "Specifika anvisningar för validerade metoder"
1. Indirekt bakgrundsbelysning kan underlätta tidig detektion av gula syrazoner på Petrifilm RCC-plattan. Koliforma kolonier kan börja framträda
efter 6 timmars inkubering, som diskreta gula zoner, vilket indikerar kolonibildande enheter (se figur e). Fortsätt att inkubera plattorna för
detektion av ytterligare syrazoner och/eller röda kolonier sammanhängande med syra. Räkna ej kolonier utanför odlingsytan, då dessa
ej utsatts för mediets selektiva inverkan. Räkna ej artefakter i form av eventuella luftbubblor.
Vissa koliforma stammar producerar stora syramängder. Vid förekomst av dessa organismer, kan fusion av de gula syrazonerna inträffa för
cirka tjugo kolonier per platta. Den runda odlingsytan utgör cirka 20 cm². Uppskattningar kan göras på plattor med fler än 50 syrazoner,
genom att räkna antalet syrazoner i en eller flera representativa rutor och bestämma genomsnittligt antal per ruta. För att erhålla
totalräkning för hela plattan multipliceras sedan genomsnittsantalet med 20.
, 0,1% peptonvatten , peptonsaltspädningsmedel
1, 3 3
, saltlösning (0,85–0,90%), bisulfitfritt letheen-spad eller
2, 3
2