ก�รเตรี ย มเครื ่ อ งมื อ สำ � หรั บ ทดสอบเชื ้ อ ก่ อ โรคระดั บ โมเลกุ ล โดยวิ ธ ี 3M™
1. เปิ ด ใช้ ซ อฟต์ แ วร์ ท ดสอบเชื ้ อ ก่ อ โรคระดั บ โมเลกุ ล โดยวิ ธ ี 3M™ แล้ ว เข้ า สู ่ ร ะบบ ติ ด ต่ อ ตั ว แทนชุ ด ทดสอบอาหารปลอดภั ย ของ 3M ของ
คุ ณ เพื ่ อ รั บ ประกั น ว่ า ซอฟต์ แ วร์ เ ป็ น เวอร์ ช ั น ที ่ อ ั ป เดตล่ า สุ ด
2. เปิ ด เครื ่ อ งมื อ สำ า หรั บ ทดสอบเชื ้ อ ก่ อ โรคระดั บ โมเลกุ ล โดยวิ ธ ี 3M
3. สร้ า งหรื อ แก้ ไ ขชุ ด การทำ า งานที ่ ม ี ข ้ อ มู ล สำ า หรั บ แต่ ล ะตั ว อย่ า ง อ้ า งอิ ง คู ่ ม ื อ การใช้ ง านระบบทดสอบเชื ้ อ ก่ อ โรคระดั บ โมเลกุ ล โดยวิ ธ ี 3M
สำ า หรั บ รายละเอี ย ดเพิ ่ ม เติ ม
หม�ยเหตุ : ต้ อ งรอให้ เ ครื ่ อ งมื อ สำ า หรั บ ทดสอบเชื ้ อ ก่ อ โรคระดั บ โมเลกุ ล โดยวิ ธ ี 3M มี อ ุ ณ หภู ม ิ ถ ึ ง 60°C และรั ก ษาระดั บ อุ ณ หภู ม ิ น ี ้ ไ ว้ ก่ อ น
ที ่ จ ะใส่ ถ าดใส่ ห ลอดทดสอบสำ า หรั บ เข้ า เครื ่ อ งทดสอบระดั บ โมเลกุ ล โดยวิ ธ ี 3M ที ่ ม ี ห ลอดทำ า ปฏิ ก ิ ร ิ ย าเข้ า ไป ขั ้ น ตอนของการทำ า ความร้ อ นนี ้
ใช้ เ วลาประมาณ 20 นาที แ ละบ่ ง ชี ้ ด ้ ว ยไฟสี ส ้ ม บนแถบบอกสถานะของเครื ่ อ ง เมื ่ อ เครื ่ อ งมื อ พร้ อ มที ่ จ ะเริ ่ ม ต้ น การทำ า งาน แถบบอกสถานะดั ง
กล่ า วจะเปลี ่ ย นเป็ น สี เ ขี ย ว
ก�รไลซี ส
1. รอให้ ห ลอดสารละลายไลซี ส (LS) อุ ่ น ขึ ้ น โดยนำ า ที ่ ว างหลอดไปไว้ ใ นอุ ณ หภู ม ิ ห ้ อ ง (20-25°C) ข้ า มคื น (16-18 ชั ่ ว โมง) ทางเลื อ กอื ่ น ๆ
นอกเหนื อ จากการวางหลอด LS ทิ ้ ง ไว้ ท ี ่ อ ุ ณ หภู ม ิ ห ้ อ งก็ ค ื อ การวางหลอด LS ไว้ บ นโต๊ ะ ปฏิ บ ั ต ิ ง านของห้ อ งปฏิ บ ั ต ิ ก ารอย่ า งน้ อ ย 2 ชั ่ ว โมง
การนำ า หลอด LS ไปบ่ ม ในที ่ ต ู ้ บ ่ ม เชื ้ อ ที ่ อ ุ ณ หภู ม ิ 37 ± 1°C เป็ น เวลา 1 ชั ่ ว โมง หรื อ วางหลอดเครื ่ อ งทำ า ความร้ อ นบล็ อ กคู ่ แ บบแห้ ง เป็ น เวลา
30 วิ น าที ท ี ่ อ ุ ณ หภู ม ิ 100°C
2. พลิ ก หลอดที ่ ป ิ ด ฝาไปมาเพื ่ อ ผสมให้ เ ข้ า กั น ดำ า เนิ น การขั ้ น ตอนถั ด ไปภายใน 4 ชั ่ ว โมง
3. นำ า อาหารเหลวเพิ ่ ม จำ า นวนเชื ้ อ ออกจากตู ้ บ ่ ม เชื ้ อ
4. ต้ อ งใช้ ห ลอด LS หนึ ่ ง หลอดสำ า หรั บ ตั ว อย่ า งแต่ ล ะตั ว อย่ า งและตั ว อย่ า งควบคุ ม ผลลบ (NC) (อาหารเลี ้ ย งเชื ้ อ ผสมสารอาหารชนิ ด พิ เ ศษที ่
ปลอดเชื ้ อ )
4.1 แถวของหลอด LS สามารถตั ด ออกเพื ่ อ ให้ ม ี จ ำ า นวนหลอด LS ตามที ่ ต ้ อ งการได้ เลื อ กจำ า นวนหลอด LS แต่ ล ะหลอดหรื อ แถวที ่ ม ี 8
หลอดตามความจำ า เป็ น วางหลอด LS ในที ่ ว างหลอดที ่ ว ่ า งอยู ่
4.2 เพื ่ อ หลี ก เลี ่ ย งการปนเปื ้ อ นข้ า ม ให้ เ ปิ ด ฝาของหลอด LS ทั ้ ง แถวในครั ้ ง เดี ย ว และใช้ ป ลายปิ เ ปตต์ อ ั น ใหม่ ส ำ า หรั บ ถ่ า ยสารแต่ ล ะขั ้ น ตอน
4.3 ถ่ า ยตั ว อย่ า งที ่ เ พิ ่ ม จำ า นวนเชื ้ อ แล้ ว ลงในหลอด LS ดั ง ที ่ อ ธิ บ ายไว้ ข ้ า งล่ า งนี ้
ถ่ า ยตั ว อย่ า งที ่ เ พิ ่ ม จำ า นวนเชื ้ อ แล้ ว แต่ ล ะตั ว อย่ า งลงในหลอด LS แต่ ล ะหลอดเป็ น อั น ดั บ แรก ถ่ า ย NC เป็ น ลำ า ดั บ สุ ด ท้ � ย
4.4 ใช้ เ ครื ่ อ งมื อ เปิ ด /ปิ ด ฝาหลอดไลซิ ส โดยวิ ธ ี 3M™ ในการเปิ ด ฝาหลอด LS ที ล ะแถว
4.5 ทิ ้ ง ฝาหลอด LS – หากจะเก็ บ ไลเซตเอาไว้ เ พื ่ อ ทดสอบซ้ ำ า ให้ ว างฝาในภาชนะที ่ ส ะอาดเพื ่ อ นำ า กลั บ มาใช้ ห ลั ก การไลซิ ส หลั ก การไล
ซิ ส สำ า หรั บ การดำ า เนิ น การจั ด การไลเซตที ่ เ ก็ บ ไว้ ดู ภ าคผนวก A
4.6 ถ่ า ยตั ว อย่ า ง 20 ไมโครลิ ต รลงในหลอด LS ยกเว้ น ว่ า จะระบุ ไ ว้ เ ป็ น อย่ า งอื ่ น ในเกณฑ์ ว ิ ธ ี จ ากตาราง 2, 3 หรื อ 4
5. ทำ า ซ้ ำ า ขั ้ น ตอน 4.2 เพื ่ อ เพิ ่ ม ปริ ม าณตั ว อย่ า งแต่ ล ะชนิ ด ลงในหลอด LS เดิ ม ที ่ อ ยู ่ ใ นแถวนั ้ น
6. ทำ า ซ้ ำ า ขั ้ น ตอนที ่ 4.1 ถึ ง 4.6 ตามความจำ า เป็ น สำ า หรั บ จำ า นวนตั ว อย่ า งที ่ จ ะทดสอบ
7. เมื ่ อ ถ่ า ยตั ว อย่ า งทั ้ ง หมดเสร็ จ แล้ ว ให้ ถ ่ า ย NC20 ไมโครลิ ต ร (อาหารเลี ้ ย งเชื ้ อ ผสมสารอาหารชนิ ด พิ เ ศษที ่ ป ลอดเชื ้ อ เช่ น เดมิ - เฟรเซอร์
บรอท) ลงในหลอด LS ห้ า มใช้ น ้ ำ า เป็ น NC
8. ตรวจสอบว่ า อุ ณ หภู ม ิ ข องฮี ท บล็ อ คสำ า หรั บ ใส่ ห ลอดทดสอบระดั บ โมเลกุ ล โดยวิ ธ ี 3M อยู ่ ท ี ่ 100 ±1°C
9. วางที ่ ใ ส่ ห ลอด LS ลงในฮี ท บล็ อ คสำ า หรั บ ใส่ ห ลอดทดสอบระดั บ โมเลกุ ล โดยวิ ธ ี 3M และอุ ่ น ร้ อ นเป็ น เวลา 15 ±1 นาที ระหว่ า งการอุ ่ น ร้ อ น
สารละลาย LS จะเปลี ่ ย นจากสี ช มพู ( เย็ น ) เป็ น เหลื อ ง ( ร้ อ น)
ตั ว อย่ า งซึ ่ ง ไม่ ไ ด้ ร ั บ ความร้ อ นอย่ า งเหมาะสมในระหว่ า งขั ้ น ตอนการไลซี ส ชุ ด ทดสอบอาจจะถื อ ว่ า เป็ น สารที ่ อ าจมี อ ั น ตรายทางชี ว ภาพ และ
ไม่ ค วรใส่ เ ข้ า ไปในเครื ่ อ งมื อ สำ า หรั บ ทดสอบเชื ้ อ ก่ อ โรคระดั บ โมเลกุ ล โดยวิ ธ ี 3M
10. นำ า ที ่ ใ ส่ ห ลอด LS ที ่ ไ ม่ ไ ด้ ป ิ ด ออกจากฮี ท บล็ อ คและปล่ อ ยให้ เ ย็ น ลงในชิ ล บล็ อ คสำ า หรั บ ใส่ ห ลอดทดสอบระดั บ โมเลกุ ล โดยวิ ธ ี 3M อย่ า งน้ อ ย
5 นาที แ ละสู ง สุ ด 10 นาที ชิ ล ลิ ่ ง บล็ อ คสำ า หรั บ ใส่ ห ลอดทดสอบระดั บ โมเลกุ ล โดยวิ ธ ี 3M ที ่ ใ ช้ ใ นอุ ณ หภู ม ิ ห ้ อ งโดยไม่ ม ี ถ าดวางชิ ล บล็ อ ค
สำ า หรั บ ใส่ ห ลอดทดสอบระดั บ โมเลกุ ล ควรวางลงบนโต๊ ะ ปฏิ บ ั ต ิ ง านของห้ อ งปฏิ บ ั ต ิ ก ารโดยตรง เมื ่ อ เย็ น ลง สารละลายไลซี ส จะเปลี ่ ย นกลั บ
เป็ น สี ช มพู
11. นำ า ที ่ ใ ส่ ห ลอด LS ออกจากชิ ล บล็ อ คสำ า หรั บ ใส่ ห ลอดทดสอบระดั บ โมเลกุ ล โดยวิ ธ ี 3M
TH
8
(ภาษาไทย)
20 µl