Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 14

Réglage du cytomètre en flux
1. S'assurer que le cytomètre en flux est correctement aligné et calibré pour la diffusion de la lumière et l'intensité
de fluorescence selon les recommandations du fabricant et du laboratoire. Vérifier que la compensation de
couleur est réglée sur le fonctionnement standard. Se référer au manuel de l'instrument pour davantage
d'instructions.
2. Agiter au votex le tube à essai pendant 5 secondes.
3. Exécuter l'acquisition de données sur le cytomètre en flux. Au moins 75 000 événements CD45
analysés.
4. Ajuster le discriminateur et les régions en analysant le tube d'échantillon TROL 45/34/7-AAD.
Exemple d'Analyse
Les histogrammes présentés en ANNEXE sont affichés par ordre croissant, comme dans le protocole.
Calcul de CD34 Stem-Trol Control Cells
+
En utilisant les résultats de la cytométrie en flux automatiquement ajustés avec les Stem-Count ou Flow-Count
Fluorospheres de la concentration obtenue à l'aide du logiciel System II (Version 3.0) et un cytomètre en flux
COULTER EPICS XL/XLMCL.
Afin d'obtenir les déterminations de valeurs absolues calculées automatiquement sur les cytomètres en flux
COULTER EPICS XL / XL-MCL, la concentration exacte en Stem-Count ou Flow-Count Fluorospheres doit être
saisie avant l'acquisition de l'échantillon.
Saisir « CAL » en tant que nom des singulets Stem-Count ou Flow-Count Fluorospheres de la région G, puis
saisir la valeur, par exemple, 1 000 dans la zone CAL FACTOR (facteur cal) sur l'écran de dialogue STATISTICS
(statistiques) du menu SET-UP SCREEN PROTOCOL (écran de configuration du protocole).
Entrer le CAL Factor (facteur CAL) pour les Stem-Count ou Flow-Count Fluorospheres :
1. Sur l'écran Acquisition Run (exécution de l'acquisition), sélectionner Setup Screen >> Protocol (écran de
configuration du protocole).
2. Sélectionner les statistiques >> CAL FACTOR (facteur CAL).
3. Saisir le numéro de facteur CAL (concentration) figurant sur le flacon de Stem-Count ou Flow-Count
Fluorospheres.
4. Appuyer sur ENTER (ENTRÉE).
5. Sélectionner OKAY (OK).
6. À l'invite, taper Y pour yes (oui).
Lorsqu'au moins 1 000 singulets fluorosphères sont acquis, la valeur absolue de CD34
est automatiquement ajustée et peut être prise directement depuis les statistiques des résultats d'impression de
la région D.
Tableau (ci-dessous) :
Exemple de statistiques obtenues avec le tube d'échantillon TROL 45/34/7-AAD et le logiciel System II en utilisant
la fonction CAL FACTOR (facteur CAL) :
• 1 024 est la concentration en Stem-Count Fluorospheres.
• 5 248 est le nombre total de fluorosphères accumulées dans la région CAL pendant toute la durée
d'acquisition.
Dans cet exemple, toutes les valeurs sont ajustées de la manière suivante : 1 024/5 248.
Stats : Hist. non
normalisé
1
2
3
4
B60231–AE
Limitation des
listes : région ID
désactivée
A LEUKS
B CD34 POS
C CD45 DIM
D Stem-Trol Control
Cells
14 of 128
Stem-Trol Control Cells
+
Valeurs ajustées
(cellules/µL)
9 798
279
264
248
doivent être
+