Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 42

(International Society of Hematotherapy and Graft Engineering) para a determinação de células CD34
citometria de fluxo.
Os Histogramas 5 a 7 servem para monitorizar parâmetros que são importantes durante a etapa de aquisição.
Estes incluem o discriminador de Forward Scatter (Dispersão frontal), o número de eventos CD45
recolhidos e a acumulação correta de singletos de fluoroesferas.
O Histograma 8 destina-se a analisar e a distinguir eventos viáveis de eventos não viáveis quando necessário.
Criação das Regiões
Crie regiões da seguinte forma:
1. Histograma 1 — Crie uma Região A retilínea para incluir todos os leucócitos CD45
resíduos de glóbulos vermelhos e aglomerados.
2. Histograma 1 — Crie uma Região E amorfa nos linfócitos (CD45 com brilho, dispersão lateral baixa).
3. Histograma 2 — Crie uma Região B retilínea no Histograma 2 para incluir todos os eventos CD34
Scatter (Dispersão lateral) baixa a intermédia. Defina uma paragem de contagem a 75 000 eventos (eventos
CD45 ) no Histograma 2.
+
4. Histograma 3 — Crie uma Região C amorfa no Histograma 3 para incluir todos os eventos CD45
aglomerados.
5. Histograma 4 — Crie uma Região D amorfa no Histograma 4 para incluir todos os eventos aglomerados com
dispersão lateral intermédia e dispersão frontal intermédia a elevada.
6. Histograma 5 — Crie uma Região I Quadstat no Histograma 5 para verificar o limite inferior da expressão de
CD45 em eventos CD34
7. Histograma 5 — Crie uma Região H amorfa no Histograma 5 para cercar todas as Stem-Count Fluorospheres
ou Flow-Count Fluorospheres, incluindo dupletos. A região H deve estar localizada no canto superior direito
do Histograma 5.
NOTA:
8. Histograma 6 — Copie a Região D do Histograma 4 para que apareça como Região F no Histograma 6.
9. Histograma 7 — Crie uma Região G retilínea no Histograma 7 para incluir apenas singletos de Stem-Count
Fluorospheres ou Flow-Count Fluorospheres. A Região G pode ser identificada como «CAL» (Calibração)
para permitir o cálculo automático de números absolutos de HPC CD34
para obter mais detalhes).
10.Histograma 8 — Crie uma Região J retilínea no Histograma 8 para separar leucócitos viáveis (eventos
negativos 7-AAD) de eventos não viáveis (principalmente Stem-Trol Control Cells positivas para coloração
por 7-AAD).
Criação das Janelas de Análise
Crie delimitações da seguinte forma:
1. Histograma 1 — Atribua «H» ao Histograma 1 para mostrar todos os eventos exceto todas as Stem-Count
Fluorospheres ou Flow-Count Fluorospheres. Consulte o manual do instrumento relativamente à criação de
«not gates ».
2. Histograma 2 — Atribua «A» ao Histograma 2 para mostrar todos os eventos CD45
3. Histograma 3 — Atribua «A» e «B» (AB) ao Histograma 3 para mostrar todos os eventos CD45
4. Histograma 4 — Atribua «A», «B» e «C» (ABC) ao Histograma 4 para mostrar todos os eventos aglomerados
de eventos CD45
de CD45 baixa. Os eventos da Região ABCD são verdadeiras HPC (células progenitoras hematopoiéticas)
CD34 .
+
5. Histograma 5 — Não delimitado para apresentar todos os eventos.
6. Histograma 6 — Atribua «E» para mostrar linfócitos como uma verificação visual do discriminador.
7. Histograma 7 — Atribua «H» ao Histograma 7 para mostrar todas as Stem-Count Fluorospheres ou
Flow-Count Fluorospheres, incluindo dupletos.
8. Histograma 8 — Atribua «A» ao Histograma 8 para mostrar eventos CD45
B60231–AE
.
+
Certifique-se de que a Região H está definida como uma região AMORPHOUS (Amorfa).
CD34 com Side Scatter (dispersão lateral) baixa a intermédia e expressão de coloração
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e eliminar plaquetas,
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(consulte o manual do instrumento
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.
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(2,3) por
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a serem
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com Side
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dim
CD34 .
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