Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 47

• stemCXP-systemsoftware
FC 500-flowcytometre udstyret med CXP-software.
PROCEDURE
For automatisk analyse, se stemCXP System Guide (stemCXP-systemvejledningen), som følger med
stemCXP-softwarekittet for komplette instruktioner.
For manuel analyse, se indlægssedlen til Stem-Kit Reagents og følgende fremgangsmåde.
BEMÆRK:
For at standardisere analysen skal der køres en proces, når der modtages nye Stem-Kit
Reagents og herefter dagligt, ved at farve Stem-Trol Control Cells med en normal perifer
blodprøve fra en sund donor. Fordi Stem-Trol Control Cells er stabiliserede celler (dvs.
ikke-brugbare celler), kan farvning med 7-AAD Viability Dye kontrolleres visuelt på
Stem-Trol Control Cells (se overskriften: Oprettelse af histogram).
Sørg for, at flowcytometeret er korrekt justeret og standardiseret til fluorescensintensiteten i henhold til
producentens og laboratoriets retningslinjer. Sørg for, at indstillingerne for fluorescenskompensation er justeret
korrekt i henhold til producentens og laboratoriets retningslinjer.
Lad kontrolreagenset og antistofferne nå rumtemperatur.
Sæt en etikette på hvert prøverør for hvert eksperiment: TROL 45/34/7-AAD.
1. Pipettér 20 µL CD45-FITC/CD34-PE ned i prøverøret.
2. Pipettér 20 µL 7-AAD Viability Dye ned i prøverøret.
VIGTIGT:
3. Pipettér nøjagtigt 100 µL velblandet prøve af normalt helblod ved hjælp af en kalibreret positiv pipette til
overførsel eller pipette til gentagelse ned i bunden af prøverøret.
4. Klargør og tilføj Stem-Trol:
• Vortex Stem-Trol Control Cells i 5 sekunder.
• Pipettér nøjagtigt 20 µL Stem-Trol Control Cells ned i prøverøret.
• Vortex-prøverør i 5 sekunder.
5. Inkuber i mørke ved stuetemperatur (18-25 °C) i 20 minutter.
6. Tilsæt 2 mL af klargjort 1X NH
Se indlægssedlen til Stem-Kit Reagents for oplysninger om klargøring af lyseringsopløsningen.
7. Inkuber i mørke ved stuetemperatur i 10 minutter.
8. Opbevar prøverørene i et stativ anbragt på is (2-8 °C) og beskyttet mod lys.
VIGTIGT:
9. Bland forsigtigt Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres ved at vende prøveglasset 3 til 5 gange før brug.
Undgå overdreven blanding for at minimere dannelsen af luftbobler.
10.Før hentning, pipetteres 100 µL Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres over i prøverøret.
11. Vortex i 5 sekunder med det samme efter tilførsel. Opbevar ved 2-8 °C. Gentag vortex med det samme før
hentning med flowcytometer.
VIGTIGT:
B60231–AE
er KUN
Der er risiko for mangelfuld lysering, hvis blodpræparatet forbliver øverst i eller på siden
af prøverøret. Vær forsigtig ved pipettering for at undgå, at blodet kommer i kontakt med
prøverørets top eller side. Rengør prøverør med en vatpind, hvis det er nødvendigt, for
at fjerne alle spor af blodpræparatet fra prøverørets top eller side.
Cl Lysing Solution i prøverøret og vortex med det samme i 5 sekunder.
4
Der er risiko for fejlagtige resultater, hvis der pipetteres luftbobler. Overdreven blanding
af Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres kan danne luftbobler. Undlad at blande
Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres for meget, og undlad at pipettere luftbobler
ned i prøverørene.
Der er risiko for fejlagtige resultater, hvis prøven analyseres mere end 1 time
efter tilsætning af Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres. Forberedte prøver
skal analyseres inden for 1 time efter tilsætning af Stem-Count eller Flow-Count
Fluorospheres.
til automatiseret analyse
47 of 128
af Stem-Trol Control Cells på