Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 86

3. Histogram 2 – vytvořte přímočarou oblast B v histogramu 2, která bude obsahovat všechny události CD34
s nízkým až středním kolmým rozptylem. V histogramu 2 nastavte hodnotu zastavení počtu 75 000 událostí
(události CD45 ).
+
4. Histogram 3 – vytvořte amorfní oblast C v histogramu 3, která zahrnuje všechny shromážděné události
CD45 .
dim
5. Histogram 4 – vytvořte amorfní oblast D v histogramu 4 pro zahrnutí všech shromážděných událostí
s okamžitým kolmým rozptylem a okamžitým až vysokým přímým rozptylem.
6. Histogram 5 – vytvořte čtvercovou oblast I v histogramu 5, aby se ověřila spodní hranice exprimace CD45
u událostí CD34
+
7. Histogram 5 – vytvořte amorfní oblast H v histogramu 5, která bude obklopovat všechny přípravky
Stem-Count nebo Flow-Count Fluorospheres včetně dublet. Oblast H by měla být umístěna v pravém horním
rohu histogramu 5.
POZNÁMKA:
8. Histogram 6 – zkopírujte oblast D z histogramu 4 jako oblast F v histogramu 6.
9. Histogram 7 – vytvořte přímočarou oblast G v histogramu 7, která bude obklopovat pouze singlety přípravku
Stem-Count nebo Flow-Count Fluorospheres.
automatický výpočet absolutního počtu hematopoietických progenitorních buněk (HPC) CD34
informace naleznete v příručce k přístroji).
10.Histogram 8 – vytvořte přímočarou oblast J v histogramu 8, aby se oddělily leukocyty s určitou životností
(negativní události 7-AAD) od událostí bez životnosti (zejména buňky Stem-Trol Control Cells pozitivní
z hlediska obarvení 7-AAD).
Vytvoření "gatů"
Následujícím způsobem vytvořte gaty:
1. Histogram 1 – přiřaďte položku „H" k histogramu 1, aby se zobrazovaly všechny události kromě přípravků
Stem-Count nebo Flow-Count Fluorospheres. Pokyny ohledně vytváření položek „not gates" (položky, které
„nejsou gaty"), naleznete v příručce k přístroji.
2. Histogram 2 – přiřaďte položku „A" k histogramu 2, aby se zobrazovaly všechny události CD45
3. Histogram 3 – přiřaďte položky „A" a „B" (AB) k histogramu 3, aby se zobrazovaly všechny události CD45
CD34 .
+
4. Histogram 4 – přiřaďte položky „A", „B" a „C" (ABC) k histogramu 4, aby se zobrazovaly všechny shromážděné
události CD45 CD34
+
z oblasti ABCD jsou skutečné hematopoietické progenitorní buňky (HPC) CD34
5. Histogram 5 – bez gatu, pro zobrazení všech naměřených částic.
6. Histogram 6 – přiřaďte položku „E" pro zobrazení lymfocytů jako vizuální kontroly v diskriminátoru.
7. Histogram 7 – přiřaďte položku „H" k histogramu 7, aby se zobrazovaly všechny přípravky Stem-Count nebo
Flow-Count Fluorospheres včetně dublet.
8. Histogram 8 – přiřaďte položku „A" k histogramu 8, aby se zobrazovaly události CD45
Nastavení průtokového cytometru
1. Ujistěte se, že průtokový cytometr je řádně seřízen a standardizován pro měření rozptylu světla a intenzity
fluorescence podle doporučení výrobce přístroje a laboratorních směrnic. Ověřte, že je kompenzace barev
nastavena pro standardní provoz. Další pokyny naleznete v příručce k přístroji.
2. Zkumavky míchejte po dobu 5 sekund.
3. Proveďte získání dat na průtokovém cytometru. Analyzováno musí být nejméně 75 000 událostí CD45
4. Upravte diskriminátor a oblasti provedením analýzy zkumavky TROL 45/34/7-AAD.
Příklad analýzy
Histogramy uvedené v příloze jsou zobrazeny vzestupně podle počtu pro zobrazení v protokolu.
B60231–AE
.
Ověřte, že je oblast H vykreslena jako oblast AMORPHOUS (Amorfní).
s nízkým až středním kolmým rozptylem a nízkou exprimací obarvení CD45. Události
+
Oblast G lze označit „CAL", aby bylo možné provádět
86 of 128
(podrobnější
+
.
+
.
+
.
+
+
+
.
+