Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 99

7. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 10 мин, в защищенном от света месте.
8. Храните пробирки в штативе на льду (2–8°C), защищая от света.
ВАЖНО:
9. Осторожно перемешайте Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres,
3–5 раз перед использованием. Избегайте избыточного перемешивания, чтобы свести к минимуму
образование пузырьков воздуха.
10.До сбора перенесите пипеткой 100 мкл Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres в пробирку.
11. Обрабатывайте на вортексе в течение 5 секунд сразу же после каждого добавления.
при 2–8°C. Повторите обработку на вортексе непосредственно перед сбором данных проточной
цитометрии.
ВАЖНО:
Сводка по приготовлению (этикетка пробирки: TROL45/34/7-AAD)
Реагенты и пробы
CD45-FITC / CD34-PE
Краситель 7-аминоактиномицин D
(7-AAD) для анализа жизнеспособности
клеток
Цельная кровь
Stem-Trol Control Cells
Обработайте на вортексе — инкубируйте при комнатной температуре в течение
20 минут. Хранить в темном месте
1X NH Cl Lysing Solution
4
Обработайте на вортексе — инкубируйте при комнатной температуре в течение
10 минут. Хранить в темном месте
Stem-Count Fluorospheres
ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕГИОНОВ СЕЛЕКЦИИ ВРУЧНУЮ И МЕТОД АНАЛИЗА
Настройка протокола
Проточный цитометр должен быть оборудован средствами детекции прямого рассеяния, бокового
рассеяния и четырех каналов флуоресценции.
Flow-Count Fluorospheres) используйте полосовой фильтр диапазонов 620 нм.
мониторинга красителя жизнеспособности 7-AAD) используйте длинноволновой фильтр 675 нм.
ЗАМЕЧАНИЕ: Такие схема регионов селекции и серия из 8 гистограмм, как указано для анализа
образца, должны использоваться для контрольных клеток Stem-Trol Control
Cells. Так как контрольные клетки Stem-Trol Control Cells по характеристикам
размера приближены к размерам нормальных незрелых кроветворных клеток, и
экспрессируют антигены CD45 и CD34 с приблизительно такой же плотностью,
отсутствует необходимость менять границы регионов по каналам Forward
Scatter (Прямое рассеяние), Fluorescence 1 (Флуоресценция 1) и Fluorescence 2
(Флуоресценция 2). Однако, так как характеристики бокового рассеяния
контрольных клеток Stem-Trol Control Cells являются уникальными, можно
скорректировать границы региона по боковому рассеянию. Регионы A, B, C и D
(определения регионов см. под заголовком «Создание региона») должны быть
изменены, чтобы включать кластер характеристик контрольных клеток Stem-Trol
Control Cells.
B60231–AE
Риск ошибочных результатов в случае пипетирования пузырьков воздуха.
Излишнее перемешивание Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres может
привести к созданию пузырьков воздуха. Не перемешивайте чрезмерно Stem-Count
или Flow-Count Fluorospheres и не пипетируйте пузырьки воздуха в пробирки в
пробой.
Риск получения ошибочных результатов в случае анализа пробы через более
чем 1 час после добавления Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres. Анализ
приготовленных проб следует выполнить в течение 1 часа после добавления
Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres.
Объем
20 мкл
20 мкл
100 мкл
20 мкл
2 мл
100 мкл
Для канала FL3 (для мониторинга Stem-Count или
99 of 128
переворачивая флакон
Храните
Для канала FL4 (для