Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 28

Calcolo di CD34 Stem-Trol Control Cells
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Uso dei risultati della citometria a flusso regolati automaticamente con la concentrazione nominale di Stem-Count
o Flow-Count Fluorospheres ottenuta utilizzando il software System II (versione 3.0) e un citometro a flusso
COULTER EPICS XL/XLMCL.
Per ottenere le determinazioni della conta assoluta calcolate automaticamente nei citometri a flusso
COULTER EPICS XL / XL-MCL, è necessario immettere la concentrazione nominale corretta di Stem-Count o
Flow-Count Fluorospheres prima dell'acquisizione dei campioni.
Immettere "CAL" come nome dei singoletti di Stem-Count o Flow-Count Fluorospheres, regione G, e immettere il
valore (ad es. 1.000) nella casella CAL FACTOR (Fattore CAL) nella finestra di dialogo STATISTICS (Statistiche)
del menu SET-UP SCREEN PROTOCOL (Protocollo schermata configurazione).
Immissione di CAL Factor (Fattore CAL) per Stem-Count o Flow-Count Fluorospheres:
1. Nella schermata Acquisition Run (Operazione di acquisizione), selezionare Setup Screen (Schermata
configurazione) >> Protocol (Protocollo).
2. Selezionare Statistics (Statistiche) >> CAL FACTOR (Fattore CAL).
3. Immettere il numero del fattore CAL (concentrazione nominale) presente sulla fiala di Stem-Count o
Flow-Count Fluorospheres.
4. Premere ENTER (INVIO).
5. Selezionare OKAY.
6. Quando richiesto, digitare Y per sì.
Quando vengono acquisiti almeno 1.000 singoletti di fluorosfere, la conta assoluta di CD34
viene regolata automaticamente ed è possibile estrapolarla direttamente dai risultati stampati delle statistiche della
regione D.
Tabella (di seguito):
Esempio di statistica ottenuta con la provetta TROL 45/34/7-AAD nel software System II, utilizzando la funzione
CAL FACTOR (Fattore CAL), in cui:
• 1.024 è la concentrazione nominale di Stem-Count Fluorospheres.
• 5.248 è il numero totale di fluorosfere accumulate nella regione CAL nel corso dell'intera procedura di
acquisizione.
In questo esempio, tutti i conteggi sono regolati per: 1.024/5.248.
Statistiche:
istogramma non
normalizzato
1
2
3
4
7
5
1. Registrare le conte assolute regolate (cellule/µL) nelle regioni D delle provette TROL 45/34/7-AAD.
.
Esempio:
.
Provetta TROL 45/34/7-AAD: Stem-Trol Control Cells = 248 cellule/µL.
2. Moltiplicare questo conteggio preciso per il fattore di normalizzazione (N) = 5.
.
NOTA:
.
È necessario normalizzare la conta assoluta di Stem-Trol Control Cells rispetto ai volumi aggiunti durante il test:
determinare N dividendo il volume del riferimento di conteggio (singoletti di Stem-Count Fluorospheres) per il volume di
Stem-Trol Control Cells aggiunto alla provetta test.
.
B60231–AE
Elenco gating: ID
regione disabilitato
A LEUKS
B CD34 POS
C CD45 DIM
D Stem-Trol Control
Cells
G CAL 1024
H Tutti i
Stem-Count Fluorospheres
28 of 128
Stem-Trol Control Cells
+
Conteggi regolati
(Cellule/µL)
9.798
279
264
248
1.024
1.046