Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 56

3. Histogram 2 – skapa en rätlinjig region B på histogram 2 som ska inkludera alla CD34
till intermediär Side Scatter (sidospridning). Ställ in ett stoppantal på 75 000 händelser (CD45
histogram 2.
4. Histogram 3 – skapa en amorf region C på histogram 3 som ska inkludera alla CD45
5. Histogram 4 – skapa en amorf region D på histogram 4 som ska inkludera alla klusterhändelser med medelhög
side scatter (sidospridning) och medelhög till hög forward scatter (framåtspridning).
6. Histogram 5 – skapa en Quadstat-region I på histogram 5 för att verifiera den nedre gränsen för CD45-uttryck
på CD34 -händelser.
+
7. Histogram 5 – skapa en amorf region H på histogram 5 som ska omge alla Stem-Count eller Flow-Count
Fluorospheres, inklusive dubbletter. Region H ska vara placerad i det övre högra hörnet av histogram 5.
OBS!
8. Histogram 6 – kopiera region D från histogram 4 som region F i histogram 6.
9. Histogram 7 – skapa en rätlinjig region G på histogram 7 som ska inkludera enbart singletter av Stem-Count
eller Flow-Count Fluorospheres. Region G kan etiketteras "CAL" (kalibrering) för att möjliggöra automatisk
beräkning av absoluta antal CD34
10.Histogram 8 – skapa en rätlinjig region J på histogram 8 som ska separera viabla leukocyter (7-AAD-negativa
händelser) från icke viabla händelser (huvudsakligen Stem-Trol Control Cells positiva för 7-AAD-färgning).
Skapa Gate
Skapa gates enligt följande:
1. Histogram 1 – tilldela "H" till histogram 1 för visning av alla händelser med undantag av alla Stem-Count eller
Flow-Count Fluorospheres. Se instrumentets bruksanvisning för anvisningar om att skapa "not gates".
2. Histogram 2 – tilldela "A" till histogram 2 för visning av alla CD45
3. Histogram 3 – tilldela "A" och "B" (AB) till histogram 3 för visning av alla CD45
4. Histogram 4 – tilldela "A" och "B" och "C" (ABC) till histogram 4 för visning av alla CD45
CD34 -klusterhändelser med låg till medelhög side scatter (sidospridning) och lågt CD45-färgningsuttryck.
+
Händelser från region ABCD är verkliga CD34
5. Histogram 5 – ogated för visning av alla händelser.
6. Histogram 6 – tilldela "E" för visning av lymfocyter som en visuell kontroll för diskriminatorn.
7. Histogram 7 – tilldela "H" till histogram 7 för visning av alla Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres,
inklusive dubbletter.
8. Histogram 8 – tilldela "A" till histogram 8 för visning av CD45
Inställning av flödescytometer
1. Kontrollera att
fluorescensintensitet enligt tillverkarens och laboratoriets riktlinjer. Kontrollera att färgkompensation har
ställts in för standardanvändning. Ytterligare instruktioner finns i instrumentets bruksanvisning.
2. Vortexa provrören i 5 sekunder.
3. Utför datainsamling på flödescytometern. Minst 75 000 CD45
4. Justera diskriminatorn och regionerna genom att analysera provröret TROL 45/34/7-AAD.
Analysexempel
Histogrammen i BILAGA visas i stigande nummerordning så som de visas i protokollet.
Beräkning av CD34
+
Använd flödescytometriska resultat automatiskt justerade med Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres
analyserade koncentration som erhållits med System II-programvara (version 3.0) och en COULTER EPICS
XL/XLMCL flödescytometer.
För att kunna erhålla automatiskt beräknade bestämningar av absoluta antal på COULTER EPICS XL/XL-MCL
flödescytometrar måste rätt analyserad koncentration för Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres anges före
provinsamling.
B60231–AE
Säkerställ att region H ritas som en AMORPHOUS (amorf) region.
HPC (mer information finns i instrumentets bruksanvisning).
+
flödescytometern är
Stem-Trol Control Cells
HPC.
+
-händelser.
+
korrekt inställd och
-händelser måste analyseras.
+
56 of 128
-klusterhändelser.
dim
-händelser.
+
CD34 -händelser.
+ +
standardiserad för
-händelser med låg
+
-händelser) i
+
+
ljusspridning och