Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 76

• Kalibrowana pipeta z dodatnim wypieraniem (20 µL, 100 µL, 2 mL) i końcówki lub kalibrowana pipeta
powtarzalna (20 µL, 100 µL, 2 mL) oraz końcówki.
• Kalibrowane pipety standardowe (20 µL, 100 µL, 2 mL) i końcówki.
• Mikser Vortex.
• Zegar.
• Cytometr przepływowy.
• Oprogramowanie systemu stemCXP WYŁĄCZNIE do analizy automatycznej komórek kontrolnych Stem-Trol
Control Cells na cytometrach przepływowych FC 500 wyposażonych w oprogramowanie CXP.
PROCEDURA
W przypadku analizy automatycznej pełne instrukcje zawiera stemCXP System Guide (Przewodnik systemu
stemCXP) dostarczony z oprogramowaniem stemCXP System.
Analiza ręczna, patrz ulotka dołączona do opakowania odczynników Stem-Kit Reagents i następująca procedura.
UWAGA: W celu standaryzowania analizy, po otrzymaniu nowych odczynników Stem-Kit
Reagents, a następnie codziennie, należy przeprowadzać kontrolę procesu przez
barwienie komórek kontrolnych Stem-Trol Control Cells za pomocą próbki prawidłowej
krwi obwodowej od zdrowego dawcy. Ponadto komórki kontrolne Stem-Trol Control
Cells to komórki stabilizowane (tj. nieżywotne), barwienie barwnikiem żywotności 7-AAD
Viability Dye może być wzrokowo sprawdzone na komórkach kontrolnych Stem-Trol
Control Cells (patrz nagłówek: Tworzenie histogramu).
Upewnić się, że cytometr przepływowy jest prawidłowo wyrównany i wystandaryzowany do intensywności
fluorescencji według wytycznych producenta i laboratoryjnych.
fluorescencji są prawidłowo ustawione zgodnie z wytycznymi producenta i laboratoryjnymi.
Doprowadzić odczynnik kontrolny i przeciwciała do temperatury pokojowej.
Dla każdego analizatora oznaczyć jedną probówkę: TROL 45/34/7-AAD.
1. Pipetować 20 µL odczynnika CD45-FITC / CD34-PE do probówki.
2. Dodać do probówki 20 µL barwnika żywotności 7-AAD Viability Dye.
WAŻNE:
3. Na dno probówki dokładnie pipetować 100 µL dobrze wymieszanej prawidłowej próbki krwi pełnej używając
skalibrowanej pipety z dodatnim wypieraniem lub pipety powtarzalnej.
4. Przygotowanie i dodanie komórek kontrolnych Stem-Trol:
• Worteksować komórki kontrolne Stem-Trol Controls Cells przez 5 sekund.
• Dokładnie pipetować 20 µL komórek kontrolnych Stem-Trol Control Cells do probówki.
• Worteksować probówki przez 5 sekund.
5. Inkubacja w temperaturze pokojowej (18–25°C) przez 20 minut, z zapewnieniem ochrony przed światłem.
6. Dodać 2 mL przygotowanego roztworu 1X NH
przez 5 sekund.
Szczegóły przygotowywania roztworu Lysing Solution, patrz ulotka dołączona do opakowania odczynników
Stem-Kit Reagents.
7. Inkubacja w temperaturze pokojowej przez 10 minut, z zapewnieniem ochrony przed światłem.
8. Przechowywać probówki w statywie umieszczonym w lodzie (2–8°C) i zabezpieczonym przed światłem.
B60231–AE
Jeżeli próbka krwi pozostaje na górze lub ściance probówki testowej, istnieje ryzyko
niepełnej lizy. Zachować ostrożność podczas pipetowania, aby nie dopuścić do
dotknięcia przez krew góry lub ścianek probówki testowej. W razie potrzeby oczyścić
probówkę wacikiem bawełnianym, aby usunąć wszystkie ślady próbki krwi z góry
i ścianek probówki testowej.
Upewnić się, że ustawienia kompensacji
Cl Lysing Solution do probówki i natychmiast worteksować
4
76 of 128