BD ProbeTec Manual Del Usario página 48

ProbeTec Chlamydia trachomatis (CT) Q

Amplified DNA Assay
VERWENDUNGSZWECK
In Verbindung mit dem BD Viper System im Extraktionsmodus verwendet der BD ProbeTec CT Q
(Amplifizierter DNA-Test BD ProbeTec CT Q
qualitativen Nachweis von Chlamydia trachomatis-DNA in klinisch entnommenen Proben aus Endozervikalabstrichen
der Frau und Urethralabstrichen des Mannes, von Patientinnen (in klinischer Umgebung) selbst entnommenen
Vaginalabstrichen und Urinproben von Mann und Frau. Der Test ist für asymptomatische und symptomatische
Patienten vorgesehen und dient als Hilfsmittel bei der Diagnose einer urogenitalen Clamydieninfektion.
ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG
Nach Schätzungen der Weltgesundheitsorganisation werden jedes Jahr 92 Millionen neue Infektionsfälle von
Chlamydia trachomatis diagnostiziert.
festgestellte Infektionskrankheit mit über 1.000.000 Fällen im Jahr 2006, von der Frauen drei Mal so häufig
betroffen sind wie Männer.
zugenommen, was hauptsächlich an der Ausweitung von Screening-Programmen für asymptomatische Patienten
und dem Einsatz immer besserer Diagnosetests liegt. 70 – 90 % der Chlamydieninfektionen bei Frauen verlaufen
asymptomatisch, was zur Folge hat, dass bei Frauen langfristige Gesundheitsprobleme auftreten können, ohne dass
sie sich des Risikos bewusst sind.
Adnexitis (Pelvic inflammatory disease, PID) und Unfruchtbarkeit sowie zu untergewichtigen Neugeborenen. 50 %
der mit C. trachomatis infizierten Männer weisen ebenfalls keine Symptome auf, und die Infektion kann unbehandelt
zu akuten Harnleiterentzündungen sowie zu Nebenhoden- und Mastdarmentzündungen führen. C. trachomatis wird
durch sexuellen Kontakt übertragen, die Infektion kann jedoch auch im Geburtskanal erfolgen und zu neonataler
Konjunktivitis und/oder Clamydien-Pneumonie führen.
Gegen Clamydieninfektionen kann effektiv mit Antibiotika behandelt werden, und das Beratungskomitee zur
Vermeidung von HIV (Human Immunodeficiency Virus) und sexuell übertragbaren Krankheiten spricht sich für
aktive Kontrollprogramme aus, die als primäre Interventionen gegen die HIV-Epidemie auf behandelbare sexuell
übertragbare Krankheiten abzielen.
veröffentlicht, wonach junge, sexuell aktive Frauen sowie ältere Personen, bei denen mit einem erhöhten
Infektionsrisiko zu rechnen ist, auf Chlamydia trachomatis untersucht werden sollten, um Komplikationen zu
vermeiden und die Übertragung einzuschränken.
Die Chlamydiaceae sind gramnegative, obligate intrazelluläre Bakterien. Sie bilden charakteristische intrazelluläre
Einschlüsse, die nach antigenspezifischer Färbung unter dem Fluoreszenzmikroskop in der Zellkultur erkennbar sind.
Es sind 15 Serovare von C. trachomatis bekannt. Diese umfassen drei Gruppen, von denen jede mit einem anderen
Krankheitsstatus in Zusammenhang steht: die Trachoma-Serovare A – C, die okulogenitalen Serovare D – K und
die Lymphogranuloma venereum-Serovare L
Infektionen gehören Kulturtests und immunologische Tests sowie der Nachweis von Nukleinsäuren durch direkte
Hybridisierung oder Amplifikation. In der Vergangenheit galt die Kultivierung als „Goldstandard" für den Nachweis
von C. trachomatis, die zunehmende Empfindlichkeit amplifizierter Methoden hat jedoch zu ihrem vermehrten Einsatz
geführt, was wiederum zum Anstieg der bekannten Infektionsfälle beigetragen hat.
In Kombination mit dem BD Viper System beinhaltet der amplifizierte DNA-Test BD ProbeTec CT Q
Eisenoxid-basierte DNA-Extraktion von klinischen Proben mittels BD FOX Extraktionstechnologie. Der chemischen
Lyse von Zellen folgt dabei die Bindung von DNA an paramagnetische Partikel, die Bereinigung der gebundenen
Nukleinsäure und die Elution in einem amplifizierungskompatiblen Puffer. Falls vorhanden, wird C. trachomatis-DNA
dann durch Strangverdrängungsamplifikation (Strand Displacement Amplification, SDA) einer spezifischen Zielsequenz
in Gegenwart einer mit fluoreszierendem Farbstoff markierten Nachweissonde nachgewiesen.
VERFAHRENSGRUNDLAGEN
Der amplifizierte DNA-Test BD ProbeTec CT Q
trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Q
dem BD Viper System und der BD FOX Extraktionstechnologie. Proben werden entnommen und in den jeweiligen
Transportbehältern transportiert, die die Integrität der C. trachomatis-DNA im angegebenen Temperatur- und
Zeitrahmen gewährleisten.
Urin- und Abstrichproben werden im BD Viper Lysierblock einer Vorwärmstufe unterzogen, um Schleim aufzulösen
und die Probe zu homogenisieren. Nach dem Kühlvorgang werden die Proben in das BD Viper System geladen, in dem
dann alle Schritte zur Extrahierung und Amplifizierung der Ziel-DNA vorgenommen werden, ohne dass ein weiteres
Eingreifen erforderlich ist. Die Probe wird in ein Extraktionsröhrchen übertragen, das Eisenoxidpartikel in löslicher
Folie und getrockneter Extraktionskontrolle enthält. Es wird ein hoher pH-Wert verwendet, um die bakteriellen Zellen
zu lösen und ihre DNA in der Lösung freizusetzen. Anschließend wird Säure hinzugefügt, um den pH-Wert zu senken
und das Eisenoxid positiv zu laden, was wiederum zur Bindung der negativ geladenen DNA führt. Die Partikel und die
gebundene DNA werden dann mit Magneten an die Seiten des Extraktionsröhrchens gezogen, und die behandelte
Probe wird angesaugt und entsorgt. Die Partikel werden bereinigt, und es wird ein Elutionspuffer mit hohem pH-Wert
hinzugefügt, um die bereinigte DNA wiederherzustellen. Schließlich wird ein Neutralisierungspuffer verwendet, um
den pH-Wert der extrahierten Lösung für die Amplifizierung des Ziels zu optimieren.
Der amplifizierte DNA-Test BD ProbeTec CT Q
Ziel-DNA unter Verwendung von Amplifikationsprimern und einer fluoreszenzmarkierten Nachweissonde.
SDA-Reagenzien werden in zwei separaten, trennbaren Mikroschälchen getrocknet. Das Priming-Mikroschälchen
enthält Amplifikationsprimer, eine mit fluoreszierendem Farbstoff markierte Nachweissonde, Nukleotide und andere
für die Amplifikation erforderliche Reagenzien; das Amplifikations-Mikroschälchen enthält die beiden Enzyme (eine
DNA-Polymerase und eine Restriktionsendonuklease), die für die SDA-Reaktion erforderlich sind. Das BD Viper System
x ) die Technologie der Strangverdrängungsamplifikation zum direkten,
1
In den Vereinigten Staaten ist die Chlamydien-Infektion die am häufigsten
2 Die Anzahl der bekannten Chlamydieninfektionen hat in den vergangenen zehn Jahren
3 C. trachomatis kann zu langfristigen Spätfolgen führen, wie z. B. aszendierender
5 Auch die US-amerikanische Preventive Services Task Force hat Empfehlungen
3,6
– L . Zu den derzeitigen Methoden zur Diagnose von C. trachomatis-
1 3
x ist vorgesehen für die Verwendung mit den BD ProbeTec Chlamydia
x Hilfsmitteln für Probenentnahme und Transport, zulässigen Reagenzien,
x beruht auf der gleichzeitigen Amplifikation und Detektion der
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x
Deutsch
x Amplified DNA Assay
7
x automatisierte
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Die