3M Listeria MDAL96 Manual Del Usuario página 107

5. Verifiser at 3M Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon har en temperatur på 100 ±1 °C. Plasser stativet med LS-rørene i 3M
Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon og varm opp i 15 ±1 minutter
testlyseringstrinnet kan vurderes som en potensiell biologisk fare og skal IKKE settes inn i 3M Instrument for molekylær deteksjon.
6. Fjern stativet med LS-rørene fra varmeblokken og la det avkjøles i 3M Kjøleblokkinnsats for molekylær deteksjon i 10 ±1 minutter
stativlokket under inkubering på 3M Kjøleblokkinnsats for molekylær deteksjon.
7. Fjern stativet med LS-rørene fra 3M Kjøleblokkinnsats for molekylær deteksjon / 3M Brett til kjøleblokk for molekylær deteksjon. Bytt lokket på
stativet med LS-rørene og vend det bestemt 3–5 ganger for å blande. Suspensjonen skal flyte fritt inne i røret.
8. Dunk lyseringsrørstativet bestemt mot laboratoriebenken 3–5 ganger.
9. Plasser stativet på laboratoriebenken. La det stå urørt i 5–10 minutter for å la resinet falle til ro. Ikke bland eller forstyrr resinet på bunnen av
røret.
99-101ºC
99-101 °C
(a) Alternativer for å holde LS-rørene ved romtemperatur, er å inkubere LS-rørene i en inkubator ved 37 ±1 °C i 1 time, eller i romtemperatur over
natten (16–18 timer).
(b) Et alternativ til å bruke tørr varme ved lyseringstrinnet, er å bruke et vannbad ved 100 ±1 °C. Sørg for at det er nok vann til å dekke opp til
væskenivået i LS-rørene. Plasser stativet med LS-rørene i vannbadet ved 100 ±1 °C og varm det i 15 ±1 minutter.
(c) LS-oppløsningen kan fryse ved behandling av færre enn 48 LS-rør. Frysing av LS-oppløsningen vil ikke påvirke testen. Dersom frysing
observeres, la LS-rørene tines i 5 minutter før blanding.
AMPLIFIKASJON
1. Ett reagensrør er nødvendig for hver prøve og NC-prøven.
1.1 Rekker av reagensrør kan kuttes opp til ønsket antall rør. Velg det nødvendige antall individuelle reagensrør eller 8-rørstrimler.
1.2 Plasser reagensrørene i et tomt stativ.
1.3 Unngå å forstyrre reagensmassen i bunnen av rørene.
2. Velg 1 reagenskontrollrør (RC) og plasser den i stativet.
3. For å unngå krysskontaminering, ta av lokket på én reagensrørrekke av gangen, og bruk ny pipettespiss ved hvert trinn av prøveoverføring.
4. Overfør lysat til reagensrørene og RC-rør som beskrevet under:
Overfør hver prøvelysering til individuelle reagensrør først etterfulgt av NC-prøven. Væt RC-røret til sist.
ADVARSEL: Vær forsiktig ved overføring av LS med pipette, da overføring av resin kan forstyrre amplifikasjonen.
4.1 Bruk 3M™ Verktøy for lukking/åpning av reagensrør til å åpne reagensrørene – én reagensrørrekke om gangen. Fjern deksel.
4.2 Overfør 20 µl av prøvelyseringen fra den øvre delen av væsken i LS-røret til det korresponderende reagensrøret. Overfør i vinkel for å unngå
å forstyrre pelletene. Bland forsiktig ved å bevege pipetten opp og ned 5 ganger.
4.3 Gjenta trinn 4.2 til alle individuelle prøvelyseringer er lagt til korresponderende reagensrør i rekken.
4.4 Dekk til reagensrørene med de medfølgende ekstra lokk, og bruk den runde siden av 3M Verktøy for lukking/åpning av reagensrør for
molekylær deteksjon til å legge på trykk med en fram-og-tilbake-bevegelse som sikrer at lokket sitter godt på.
4.5 Gjenta trinn 4.1 til 4.4 som nødvendig, for antallet prøver som skal testes.
4.6 Når alle prøvelyseringene er overført, gjenta 4.1 til 4.4 for å overføre 20 µl av NC-prøvelysat til et reagensrør.
4.7 Overfør 20 µl av NC-prøvelysat over i et RC-rør. Overfør i vinkel for å unngå å forstyrre pelletene. Bland forsiktig ved å bevege pipetten opp
og ned 5 ganger.
0-20ºC 20-25ºC
0-20 °C 20-25 °C
8
. Prøver som ikke har blitt korrekt varmebehandlet under
(b)
3X
20-25ºC
20-25 °C
3X
20-25 °C 20-25ºC
NO (Norsk)
. Ta av
(c)