3M Listeria MDAL96 Manual Del Usuario página 30

4.5 Répéter les étapes 4.1 à 4.4 au besoin pour transférer le nombre d'échantillons à analyser.
4.6 Lorsque tous les échantillons ont été transférés, transférer ensuite 20 µl de TN dans un tube de SL. Utiliser l'Outil d'encapsulage/
décapsulage pour détection moléculaire 3M – Lyse pour reboucher le tube de SL.
4.7 Mettre le couvercle sur le support de tubes de SL et tourner le support à l'envers vigoureusement 3 à 5 fois pour mélanger. La suspension
doit circuler librement dans le tube.
5. Vérifier que la température de la Pièce de bloc thermique pour détection moléculaire 3M est de 100 ± 1 °C. Placer le support de tubes de SL dans
la Pièce de bloc thermique pour détection moléculaire 3M et chauffer pendant 15 ± 1 minutes
traitement thermique adéquat pendant l'étape de lyse peuvent être considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés
dans l'Appareil de détection moléculaire 3M.
6. Retirer le support de tubes de SL du bloc chauffant et le laisser refroidir dans la Pièce de bloc réfrigérant pour détection moléculaire 3M pendant
. Retirer le couvercle du support pendant l'incubation sur la Pièce de bloc réfrigérant pour détection moléculaire 3M.
10 ± 1 minutes
(c)
7. Retirer le support de tubes de SL de l'ensemble constitué de la Pièce de bloc réfrigérant pour détection moléculaire 3M et du Plateau de bloc
réfrigérant pour détection moléculaire 3M. Replacer le couvercle sur le support de tubes de SL et le retourner énergiquement de 3 à 5 fois pour en
mélanger le contenu. La suspension doit circuler librement dans le tube.
8. Tapoter fermement le support de tubes pour lyse sur la table de laboratoire 3 à 5 fois.
9. Mettre le support sur la table de travail. Cesser de manipuler pendant 5 à 10 minutes pour que la résine puisse former un dépôt. Ne pas
mélanger ou remuer la résine au fond du tube.
99-101 °C 99-101ºC
(a) Les options pour étalonner les tubes de SL à température ambiante sont les suivantes : incuber les tubes de SL dans un incubateur
à 37 ± 1 °C pendant 1 heure ou à température ambiante pendant toute une nuit (16 à 18 heures).
(b) Une solution de rechange à l'utilisation de la chaleur sèche lors de l'étape de la lyse consiste à utiliser un bain-marie à 100 ± 1 °C. S'assurer
que le niveau d'eau atteigne celui du liquide dans les tubes de SL. Placer le support de tubes de SL dans un bain-marie à 100 ± 1 °C et
chauffer pendant 15 ± 1 minutes.
(c) Il se peut que la solution SL gèle dans le cas d'une utilisation avec moins de 48 tubes de SL. Le gel de la solution de lyse n'affectera pas le
test. Si le gel de la solution est observé, laisser les tubes de SL dégeler pendant 5 minutes avant de mélanger.
AMPLIFICATION
1. Il est nécessaire d'utiliser un tube de réactifs pour chaque échantillon et un pour le TN.
1.1 Les bandes de tubes de réactifs peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes souhaité. Sélectionner le nombre de tubes de
réactifs individuels ou de bandes de 8 tubes nécessaire.
1.2 Placer les tubes de réactifs sur un support vide.
1.3 Éviter de remuer les granules de réactifs dans le fond des tubes.
2. Sélectionner 1 tube de Témoin des réactifs (TR) et le mettre dans le support.
3. Afin d'éviter toute contamination croisée, déboucher une bande de tubes de réactifs à la fois et utiliser un nouvel embout de pipette pour chaque
étape de transfert.
4. Transférer les lysats dans les tubes de réactifs et le tube de TR comme indiqué ci-dessous :
Transférer tout d'abord chaque lysat dans les tubes de réactifs individuels, puis transférer le TN. Mouiller le tube de TR en dernier.
MISE EN GARDE : faire preuve de prudence en pipetant la SL, car le transfert de la résine peut interférer avec l'amplification.
4.1 Décapsuler les tubes de réactifs un à un sur les bandes de tubes de réactifs à l'aide de l'Outil d'encapsulage/décapsulage pour détection
moléculaire 3M™ – Réactifs. Jeter le capuchon.
4.2 Transférer 20 µl de lysat d'échantillon prélevé au niveau de la partie supérieure du liquide contenu dans le tube de SL vers le tube de réactifs
correspondant. Verser en tenant le tube incliné afin de ne pas remuer les granules. Mélanger en pipetant délicatement de haut en bas 5 fois.
4.3 Reprendre l'étape 4.2 jusqu'à ce que chaque lysat d'échantillon individuel ait été ajouté au tube de réactifs correspondant dans la bande.
4.4 Placer le capuchon supplémentaire prévu à cet effet sur les tubes de réactifs, puis prendre le bord arrondi de l'Outil d'encapsulage/
décapsulage pour détection moléculaire 3M – Réactifs et appuyer dans un mouvement de va-et-vient afin de s'assurer que le capuchon est
fermement inséré sur le tube.
4.5 Répéter les étapes 4.1 à 4.4 au besoin pour transférer le nombre d'échantillons à analyser.
20-25ºC
0-20 °C 0-20ºC 20-25 °C
8
FR
. Les échantillons qui n'ont pas été soumis à un
(b)
3X
20-25 °C 20-25ºC
3X
20-25 °C 20-25ºC
(Français)