3M Listeria MDAL96 Manual Del Usuario página 19

4.5 Reprendre les étapes 4.1 à 4.4 au besoin, en fonction du nombre d'échantillons à tester.
4.6 Une fois tous les échantillons transférés, transférer 20 µl de NC dans un tube de LS. Utiliser l'Outil d'ouverture/fermeture pour système de
détection moléculaire 3M – Lyse pour reboucher le tube de LS.
4.7 Couvrir le portoir pour tubes de LS avec le couvercle prévu à cet effet et retourner énergiquement 3 à 5 fois pour mélanger. La suspension
doit circuler librement dans le tube.
5. Vérifier que la température du Support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire 3M est de 100 ± 1 °C. Placer le portoir pour
tubes de LS dans le Support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire 3M et chauffer pendant 15 ± 1 minutes
qui n'ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l'étape de lyse peuvent être considérés comme potentiellement dangereux
et ne doivent PAS être insérés dans l'Instrument de détection moléculaire 3M.
6. Retirer le portoir pour tubes de LS du bloc chauffant et le laisser refroidir dans le Support de bloc refroidissant pour système de détection
moléculaire 3M pendant 10 ± 1 minutes
système de détection moléculaire 3M.
7. Retirer le portoir pour tube de LS du Support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M / Plateau de bloc refroidissant
pour système de détection moléculaire 3M. Replacer le couvercle sur le portoir pour tubes de LS et le retourner énergiquement 3 à 5 fois pour
mélanger. La suspension doit circuler librement dans le tube.
8. Tapoter fermement le portoir pour tubes de lyse sur le plan de travail du laboratoire 3 à 5 fois.
9. Placer le portoir sur le plan de travail du laboratoire. Attendre 5 à 10 minutes pour que la résine puisse former un dépôt. Ne pas mélanger ni
bouger la résine qui se trouve au fond du tube.
99-101ºC
99-101 °C
(a) Les alternatives pour obtenir des tubes de LS à température ambiante sont les suivantes : incuber les tubes de LS dans un incubateur à
37 ± 1 °C pendant 1 heure ou à température ambiante pendant toute une nuit (16 à 18 heures).
(b) Une alternative à l'utilisation de la chaleur sèche pour la lyse consiste à utiliser un bain-marie à 100 ± 1 °C. S'assurer que le niveau d'eau
atteint celui du liquide dans les tubes de LS. Placer le portoir pour tubes de LS dans un bain-marie à 100 ± 1 °C et chauffer pendant
15 ± 1 minutes.
(c) Il se peut que la solution LS gèle dans le cas d'une utilisation avec moins de 48 tubes de LS. Le gel de la solution LS n'affectera pas votre test.
Si la solution gèle, laisser les tubes de LS dégeler pendant 5 minutes avant de mélanger.
AMPLIFICATION
1. Il est nécessaire d'utiliser un tube de réactif pour chaque échantillon et pour le NC.
1.1 Les barrettes de tubes de réactif peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes souhaité. Sélectionner le nombre de tubes de
réactif individuels ou de barrettes de 8 tubes nécessaire.
1.2 Placer les tubes de réactif sur un portoir vide.
1.3 Éviter de toucher les pastilles réactives se trouvant au fond des tubes.
2. Sélectionner 1 tube de Contrôle de réactif (RC) et le placer dans le portoir.
3. Afin d'éviter toute contamination croisée, ouvrir une barrette de tubes de réactif à la fois et utiliser un nouvel embout de pipette pour chaque étape
de transfert.
4. Transférer les lysats dans les tubes de réactif et le tube de RC comme indiqué ci-dessous :
Transférer tout d'abord chaque lysat dans les tubes de réactif individuels, puis transférer le NC. Hydrater en dernier le tube de RC.
AVERTISSEMENT : être très attentif lorsque le lysat est prélevé dans les pipettes car un transfert de résine peut altérer l'amplification.
4.1 Ouvrir les barrettes de tubes de réactif une à une à l'aide de l'Outil d'ouverture/fermeture pour système de détection moléculaire 3M™ –
Réactif. Jeter les bouchons.
4.2 Transférer 20 µl de lysat d'échantillon prélevé au niveau de la partie supérieure du liquide contenu dans le tube de LS vers le tube de réactif
correspondant. Incliner la pipette pour ne pas agiter les pastilles. Mélanger en effectuant 5 cycles d'aspiration/refoulement avec la pipette.
4.3 Répéter l'étape 4.2 jusqu'à ce que chaque lysat d'échantillon individuel ait été ajouté au tube de réactif correspondant dans la barrette.
4.4 Refermer les tubes de réactif avec les bouchons supplémentaires fournis et utiliser le côté arrondi de l'Outil d'ouverture/fermeture pour
système de détection moléculaire 3M – Réactif afin d'exercer une pression d'avant en arrière pour s'assurer que le tube est correctement
fermé.
4.5 Reprendre les étapes 4.1 à 4.4 au besoin, en fonction du nombre d'échantillons à tester.
. Retirer le couvercle du portoir lors de l'incubation sur le Support de bloc refroidissant pour
(c)
0-20ºC 20-25ºC
0-20 °C 20-25 °C
8
FR
3X
20-25ºC
20-25 °C
3X
20-25 °C 20-25ºC
(Français)
. Les échantillons
(b)